(4）精子形态检查：    ①畸形率检查：凡是形态和结构不正常的精子统称为畸形精子。正常精液，畸形精子为10-20%，若超过20%不能作输精。    畸形原因：种公畜营养不良、采精过频、精液贮存不当。    畸形有4个类型:   a.头部畸形：b.颈部畸形： c.中段畸形：d.主段畸形：      ②精子顶体形态的检查：    正常精液,精子顶体异常率:牛5.9%.猪2.3%    顶体肿胀、缺损、脱落  （5）精子存活时间与存活指数    ①精子存活时间:采精后到精子全死亡的时间   做法：在37℃下第一次检查记下活力，每隔6-8h检查1次。每次从总液中取1d升温检查。保存温度为0-5℃。则：由开始稀释检查时间至倒数第二次检查之间的间隔时间。加上最后一次与倒数第二次检查间隔时间的一半。    ②精仔存活指数：指精液内精子平均存活时间，亦即表示精液内精子活率下降的速度。存活越长，下降速度越慢。 计算法：每相邻前后两次检查的精子平均活率与其间隔时间的乘积相加的总和。指数= 其外：还有呼吸系数 、耗氧量、抗冻系数、抗热、热震、PH 等 三、精液的稀释与保存 （一）稀释的目的：扩大精液量,延长寿命,利于保存,抑制微生物       所谓稀释：指在采得精液里，添加一定数量的、按特定配方配制的、适宜于精子存活并保持受精能力的溶液。 （二）稀释液的主要成分和生理作用 1、稀释剂：主要扩大精液容量。 2、营养剂：主要是提供营养：葡萄糖.果糖.乳糖.鲜奶.卵黄 3、保护剂：主要保护精子免受不良因素的危害   ①缓冲物质：适当的PH值。酸性缓冲剂有：柠檬酸钠、酒石酸钠、磷酸二氢钾、硫酸二氢钠等。   ②非电解质和弱电解质：降低精清中电解质浓度的作用。因电解质电离度高,能激发精子,并促精子早衰,破坏膜,使精子失去电荷而凝集。所以应加各种糖类，弱电解质，如甘氨酸等。   ③防冷刺与抗冻保持质：防冷休克和增强抗冻力。   防冷：缩醛磷脂等。抗冷：甘油.二甲基亚矾等。   ④抗菌物：有抗菌作用。青链霉素、氨苯磺胺。 4、其他添加剂：酶类、激素类、维生素类等，有利于改善精子所处的环境，以提高受精机会。 （三）稀释液的种类 1、现用稀释液:以扩大容量为目的。加入等渗的糖和奶液为主 2、常温保存稀释液:短期保存,以糖和弱酸盐为主,PH偏酸。 3、低温保存稀释液:低温保存,含卵黄或奶液为主,抗冷休克。 4、冷冻保存稀释液:超低温保存,甘油.二甲基亚砜.乙二醇,抗冻 （四）稀释液配制的基本技术原则 1、配稀释液的药物原料品质要纯净(化学纯和分析纯),准确称量 2、配制和分装稀释液的物品用具,事先都须洗干净和严格消毒 3、各种药物原料用水溶解后要过滤,以除去杂质,尔后进行消毒 4、配好的稀稀液如不现用,应注意密封保鲜,不受污染。 5、认真检查配好的成品,经常进行精液的稀释.保存效果的测定 （五）精液稀释倍数与方法 1.倍数:据射精量.配方要求.保存方法.保存时间与有效精子数定 2.方法:采精后立即进行,应作好稀释前的各种准备工作。稀释时,应将稀释液沿杯壁加入精液中,然后混匀,若高倍稀释(20-30倍),应分两步进行。稀释完后,应作活率检查。  （六）精液的保存方法    1、常温保存：15-25℃  存活3-7天    理论依据:加抑制剂,使处于半休眠状态。    常温保存稀释液配方:    牛：2水柠檬酸纳2g·kd0.04g,氨苯磺胺0.03g,          无水碳酸钠0.21g,葡萄糖0.3g ,蒸溜水100ml           将之混合,二次过滤,冷却加青链各100IU/ml,      再加100%卵黄液,再行稀释(1:3~4),之后保存。    2、低温保存：0-5℃  存5-9天。     稀释后，渐降温，在冰箱中存放慢温。配方略。    3、超低温保存：-196℃、颗粒法、塑料细管    也叫精液的冷冻保存。    四、冷冻精液制作   （一）冷冻保存机理：    1、冷冻现象及对精子的作用。    冷冻是寒冷对机体作用的第二阶段。精子在0~-60℃时就易死亡    原因有：  （1）冷冻时,精子外变成高渗液而脱水,而电解质升高,PH也失调  （2）冰晶形成,对精子产生机械压力,原生质破坏,失去保护作用  （3）冰晶能渗入精子内,破坏精子结构。  （4）精液冻结时,促进胶体凝固而破坏其胶体结构。    但冰晶形成是有条件的(0~-60℃),否则不形成冰晶,而成玻璃化    玻璃化特点：    A、水分子不进行重新排列。    B、分子无激烈运动,故无恒定冰点和不释放结晶热。    C、水溶液原均一的分散系也不遭破坏,即溶质浓度不变。    D、水分子自由能高于同温的结晶分子(不释放结晶热)。    液体在过冷溶液中,水分子可沿晶核界面形成很少的冰晶叫微晶    对精子的冷冻保存,不一定是完全的玻璃态,事实上,不可避免形成冰晶。但关键是冰晶大小,只要引起物理伤害的大冰晶不存在即可    2、危险温区及防冻保护剂的作用     甘油的抗冻作用：     一是减缓结晶,二降低危险温区上限(25%时可消除危险区)     原理：a.甘油有强的渗透性,进入细胞内代替部分水,使水.无机盐排出,降低了溶质浓度,可阻止在-150℃以下引起蛋白变性。     b.甘油进到精细胞内外,降低冰点,减缓细胞皱缩程度和脱水速度     c.由于甘油渗透到粘子细胞膜内，解冻时可避免渗透性损伤。     d.甘油保护谷--草转氨酶(GOT)免受冻害。GOT多,活率高。     e.有很强的亲水性,阻抑水结晶。    (二)冷冻技术：     1、牛精冷冻保存技术：    采精与精液检查:采后,检查容量.色泽.PH.活力.密度。    冷冻稀释液：一般包括，防冻保护剂、缓冲剂、抗生素等。         主要有：卵黄.柠檬酸钠.甘油液；卵黄.糖类.甘油液；奶类.甘油液等    精液稀释:1次稀释法--用于颗粒精液。               2次稀释法--先用无甘油的稀释液半倍稀释,再二次稀释    甘油平衡:5℃下,2-4h的平衡,使精子适应与甘油充分渗入。    冷冻及保存:分装于细管,在液氮蒸气中冻结,冷冻的速度从5℃-120℃在4分钟内完成,冻结后的精液置于-196℃的液氮中,颗粒冷冻,在广口保温瓶中,置铜筛网距氮面高度1-3cm,先预冷,在-80℃~-100℃下滴冻,停2-4分即可装袋。     解冻:因剂型不同而有差别,30-40℃水温解冻。有用高温解冻75℃下12秒,效果好,精子活率高,受胎率高,融化一半时,立即取出。      2、猪精液冷冻保存技术    目前多数处于实验阶段，不能满足实用化需要。    采精：采后,室温下静置数小时,可有利提高精子的抵抗力,活力升高。    离心：静置后离心,静置1小时,去精清再加等量甘油稀释液,当温度缓降至-5℃后再加含甘油的稀释液。    冷冻稀释液：主要成分--糖类.蛋白质.抗冻剂等。    稀释和降温：先用不含甘油的稀释液稀释至最后倍数的一半,经缓慢降温到15℃维持4h,从15℃经1h降至5℃后用甘油的稀释液稀释。    冷冻方法:以颗粒为主,与牛操作相同,颗粒大小为0.1-0.25ml ,细管以0.5-1ml效果较好(液面上4cm,18-20分钟)    解冻：50℃-60℃的温度解冻,一次50-100粒
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