亲子鉴定遵医附院细胞工程实验室万卫红第一节概述1985 年英国遗传学家Alec Jeffreys 建立了DNA 指纹技术，并用它成功地进行了第一起移民案件涉及的亲子鉴定。重大意义：开辟了法医物证DNA 分析的先河，在个体同一认定和亲子鉴定上实现了从否定、排除到认定的质的飞跃，使生物物证鉴定进入了新的纪元, 为刑事侦查、司法审判提供了有力的证据。法医DNA 技术在此后短短的20 多年里得到了飞速的发展和广泛的应用：⑴在2000 年公安部开展的打击拐卖妇女儿童专项斗争中，应用DNA 分析技术进行了大量的亲子鉴定，辨明了被拐儿童的身份。⑵美国辛普生谋杀前妻和前妻男友案的世纪审判等的广泛报道和炒作，使法医DNA 技术得到更广泛的宣传。⑶克林顿绯闻案，使得DNA 亲子鉴定已经是家喻户晓，老少皆知。今天随着法制建设的不断完善和DNA 分析技术的发展，要求进行DNA 检验的案件越来越多，法医DNA 分析如今已成为生物物证检验的常规技术。1、法医DNA 分析的研究内容 法医DNA 分析是应用现代DNA 技术，分析DNA 遗传标记在群体中的分布与传递规律，确定分析样品的一致性与遗传关系，为侦查破案和司法审判提供证据的一门科学技术。法医DNA 分析又称法医分子生物学或法医分子遗传学, 通称DNA 鉴定。所涉及的学科遗传学分子遗传学群体遗传学生物化学多门学科的交叉和综合应用分子生物学生物统计学计算机学、、、DNA 指纹技术PCR 扩增片段长度多态性分析技术三大基本技术线粒体DNA 测序法医DNA 分析技术MVR - PCR PCR - SSOP 衍生技术SSP - PCR DNA 分析技术灵敏度、检验速度、信息量将会约来越高2、法医DNA 分析的对象DNA 存在于各种生物的细胞内, 因此理论上含有细胞的各种生物材料都可以进行法医DNA 分析。从物证鉴定的角度可以分为四类：⑴人体的各种体液（斑痕）、组织、毛发及表皮脱落物；⑵各种动物成分；⑶植物的根、茎、叶、花、果与种子；⑷细菌与真菌等微生物。人体的各种体液（斑痕）及组织是法医鉴定的各类案件中涉及最多的生物物证，对于这一部分DNA 分析的应用研究最多，也最充分，是法医DNA 分析的主要客体。各类案件现场遇到的各种动物的毛；现场犯罪嫌疑人等处的动植物及土壤微生物痕迹等，这些生物物证的DNA 分析应用也约来越多，逐渐成为法医DNA 分析的常规检验对象之一。3 、法医DNA 分析的任务法医DNA 分析的最大优势：高识别率生物物证鉴定的主要目的：个体同一认定与亲子鉴定法医DNA 分析的主要任务：人以及动物的个体识别与亲子鉴定4 、法医DNA 分析在案件中的应用 法医DNA 分析可以应用于所有涉及有细胞的物证的案件中，可以进行法医DNA 检验的案件有：⑴凶杀、性犯罪、恶性械斗案；⑵在现场无意中留下指纹、毛发、唾液（烟头、口香糖等）或面罩的盗窃案、抢劫案等，以及一些投毒案等；⑶碎尸案尸源认定；⑷空难或其他灾难性事件中尸源认定、交通事故中尸源认定与确定带有可疑血痕、组织或毛发等的嫌疑肇事车是否为肇事车的案件；⑸拐卖儿童、离婚、移民、入户、寻亲、遗产继承、计划生育中超生和医院错抱婴儿的亲子鉴定；⑹器官移植、医疗纠纷中的个体识别与亲子鉴定等等。法医DNA 分析的应用范围非常广泛。5 、法医DNA 分析的特点⑴遗传标记多，信息量大。DNA 多态性标记在生物体内的分布远多于蛋白质标记, 标记多态性程度大大超过蛋白质标记。仅分析其中的少部分遗传标记就完全可以直接进行个体同一认定与亲子鉴定, 具有非常高的识别率和鉴定能力。⑵标记的遗传类型全。有按孟德尔分离和自由组合律遗传的常染色体遗传标记, 也有只父系遗传的Y 染色体的遗传标记和母系遗传的线粒体DNA 序列差异。利用DNA 遗传标记可以进行几代甚至隔代、多代的血缘关系的鉴定。⑶可分析的物证种类多，存在比较广泛。凡是含有细胞的生物材料均能进行DNA 分析，这类物质可在很多种案件中提取到。具有检材的多样性与应用的广泛性。⑷对于自然环境具有相对比较高的稳定性。DNA 遗传标记相对稳定，保存几十年的血痕、精斑仍可以进行DNA 分析, 甚至历时数千年的木乃伊也可以获得含有一定遗传信息的结果。⑸方法灵敏, 检材用量少。当前的主流技术都是以PCR 技术为基础, 具有比较高的灵敏度，理论上一个细胞的DNA 即可分析。实际应用中，灵敏度为ng 级DNA, 只需很少的检材，即可获得检验结果。⑹同一个体物证具有比对的通用性。同一个体的各种组织DNA 具有相同的序列特征，即个体组织的同一性，可以用同一个体的任一部分组织或体液得到该个体的相同的全部信息，进行比对和鉴定，而不必一定要采用相同的组织。 ⑺自动化程度高，速度快。 ⑻可以建立数据库，进行查档比对，检索破案。6、国内外进展欧洲各国初期广泛采用的主要是DNA 纹印系统，北美除DNA 纹印系统外，开发和应用了HLA DQα和Polymarker 等系统。现在世界各国广泛使用的是复合STR 系统, 并进行DNA 的直接测序分析（主要用于mtDNA ）。我国在这方面稍晚一些，所有仪器和试剂还依赖于进口。目前在研究开发的主要有以下三个微型化DNA 分析仪器：微芯片毛细管电泳装置（microchip capillary electrophoresis device ）微型热循环仪（miniature thermal cycler ）杂交阵列（hybridization array ）未来的法医DNA 分析发展方向是微型化、智能化、网络化与全自动化，从DNA 分析的结果中获得更多的个体信息。第二节亲子鉴定原理一、亲子鉴定案件亲子鉴定是法医DNA 分析应用的一个重要领域，随着技术与经济发展，越来越多的案件涉及到亲子鉴定，亲子鉴定的案件大致有: ①丈夫怀疑孩子非亲生。②非婚生育，男方怀疑孩子非亲生或女方想搞清孩子的生父究竟是谁。③强奸致孕，女方指控某男为孩子生父等。④认亲、移民、继承财产、上户口。⑤怀疑产房或育婴室调错婴儿。⑥计划生育确认孩子是否为该对夫妇所超生或领养。⑦被拐骗儿童或失散家庭成员的确认。⑧尸体（碎尸块、尸骨等）身份（尸源）确定。⑨需确定现场物证或犯罪嫌疑人衣服或家里斑迹是否为受害人所留，但受害人DNA 已被销毁，无法得到；或如进行强奸案件中精斑同一认定，但嫌疑人在逃，通过亲子鉴定确认精斑是否为嫌疑人所留。上述①～③中情况是标准的三联体亲子鉴定：参加的个体为母、子与假设父，母子关系已经确定无疑，要求鉴定假设父与孩子之间的亲子关系；其余6 种情况涉及可疑父亲、母亲双方的确定。三联体：母-子（儿子或女儿，下同）- 男三方均参加检验的情况。这样的鉴定为双亲检验。真三联体：真实存在的母- 子- 父关系的三联体。假三联体：不存在母- 子-父关系的三联体。其中被检验的男子称为假设父亲或被告父亲。如果父母均需要确定的, 则称被检验的某男、某女为假设父亲和假设母亲, 亦属于双亲检验。二联体：当受检者仅为假设父或假设母和孩子二方时，称二联体。单亲检验：只有父母一方的二联体的亲子鉴定。反转亲子鉴定：指父母已确定，检验孩子是否为他们亲生的亲子鉴定，主要见于失踪者（活体、尸体）的身份确定。二、亲子鉴定应用的遗传标记应用于亲子鉴定的DNA 遗传标记系统很多，按遗传方式可归纳分为4 类：1 、常染色体上基因座或遗传标记，按孟德尔遗传规律传递；2 、线粒体DNA 非编码区的多态性。按母系遗传方式传递，可以确定检验样品是否来自于同一母系，适用于那些父亲不能参加鉴定的母子间的单亲鉴定或同胞之间的或隔代或旁系亲缘鉴定，如再结合孟德尔遗传的遗传标记检验，可以正确确定样品间的亲缘关系；3 、Y- 染色体上基因座或遗传标记。按父系遗传方式传递，可以确定样品是否来源于同一父系。适用于那些母亲不能参加鉴定的父子间的单亲鉴定或男性同胞之间或隔代或旁系的亲缘关系鉴定，如再结合按孟德尔遗传的遗传标记检验，可以正确确定样品间的亲缘关系； 4 、X- 染色体上基因座或遗传标记。由于遗传的定向性，它适合三联体的亲子鉴定或除父子关系外的其他单亲的亲缘鉴定。三、亲子鉴定原理亲子鉴定的基本原理有以下两点：①在肯定孩子的某个等位基因是来自生父，而被控父亲（AF ）并不带有这个基因的情况下，可以排除他是孩子的生父。检查的遗传标记越多，非生物学父亲被排除的概率就越大。②在肯定孩子的某些等位基因是来自生父，而AF 也带有这些基因的情况下，不能排除他是孩子的生父。这时可以计算如果判断他是孩子生父，理论上的把握度究竟有多大。在一个家庭中，遗传规律可概括为：①孩子不可能带有双亲均无的等位基因。②孩子必定得到双亲各方的一对等位基因中的一个。③除了在双亲都带有相同基因（如A）的情况下，孩子不可能带有两个相同基因（AA ）。④某个基因在双亲中的一方或双方为纯合子时（AA ），必定要在孩子中表现出来（A）。⑤对于父系遗传的Y- 染色体的标记，子代的分型必定与父亲的分型一致，而且同一父系的所有个体的分型一致。⑥对于母系遗传的线粒体DNA ，子代的分型必定与母亲的分型一致，而且同一母系的所有个体的分型一致。双等位基因遗传标记亲子鉴定的基本遗传原理可以推广到多个等位基因的遗传标记，如STR 系统。第三节否定父权一、排除亲子关系排除亲子关系可以归纳为如下两种情况：①孩子带有母亲和AF 双方都没有的一个基因。②孩子没有AF 必定要传递给其后代的一个基因。根据亲子鉴定原理，AF 与孩子再一个遗传标记上不符合遗传规律即可以排除其父子关系，但由于突变的存在，一个不符合遗传规律，可能是由于突变造成的，而且有文献报道在真实的家系中存在两个遗传标记的突变。因此，一个遗传标记的不符合不能否定其亲子关系，要求在2个以上不同基因座同时不符合才能否定其亲子关系。二、非父排除概率非父排除概率（PE ）指不是小孩生父的男子能被遗传标记排除的概率。它是衡量遗传标记系统在亲子鉴定中实用价值大小的客观指标。表示在所有非父被控为生父的男子中，用该标记否定父权有多大的可能性。由于亲权鉴定不止使用一个基因座，有必要知道使用的全部遗传标记对于不是小孩生父的男子，否定父权有多大的可能性，即累积非父排除概率（CPE ）。累积非父排除概率（CPE ）前提条件是一个遗传标记系统独立于另一个系统，计算公式为：CPE ＝1-(1-PE1) (1-PE2) (1-PE3)(1-PEk)=1-Ⅱ(1-PEk) 式中PEk 为第k个遗传标记的PE 值。检查多种遗传标记，按各种遗传标记的遗传方式求出PE 值后，再按公式求出总的CPE 值。①基因座多态性程度越高，非父排除概