第一节   岛津LC-10AT型HPLC操作规程   目的:规范岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的使用。 范围:适用于岛津LC-10AT型高效液相色谱仪的使用。 职责:操作员对本规程的实施负责。  一、   系统组成               本系统由1个LC-10ATvp溶剂输送泵、Rheodyne 7725i手动进样阀、SPD-10Avp紫外-可见检测器、N2000色谱数据工作站和电脑等组成，另外还包括打印机。           二、  准备 1 、准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤，超声脱气20min。 2 、根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（注意方向）和定量环。 3、 配制样品和标准溶液，用合适的0.45μm滤膜过滤。（注意腐蚀性与有机系的的溶剂） 4 、检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。                       接通电源，依次开启不间断电源、 泵、检测器，待泵和检测器自检结束后，打开打印机、电脑显示器、主机，最后打开色谱工作站。 四、   参数设定 1、 波长设定：在检测器显示初始屏幕时，按[func]键1次，波长数字键闪动，输入所需波长值，按[Enter]键确认。按[CE]键退出到初始屏幕。 2 、流速设定：在泵显示初始屏幕时，按[func]键，用数字键输入所需的流速（流速一般为超过1ml/min），按[Enter]键确认。按[CE]键退出    五、  更换流动相并排气泡 1： 将管路的吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中； 2 ：逆时针转动泵的排液阀180°，打开排液阀； 3 ：按泵的[purge]键，pump指示灯亮，泵大约以9.9ml/min的高流速冲洗，3min（可设定）后自动停止，一般视管路无气泡即可。 4 ：将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。 5 ：如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。 6 ：如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，按[pump]键，冲洗3min后再按[pump]键停泵，重新接上柱并将流速重设为规定值。  六、  平衡系统 1、查看基线： 1.1：按《N2000色谱数据工作站操作规程》打开“在线色谱工作站”软件， 1.2：输入实验信息并设定各项方法参数后， 1.3：按下“数据收集”页的 [ ] 按钮。                 六、  平衡系统 2 、      2.1 ：按泵的[pump]键，泵启动，pump指示灯亮。用检验方法规定的流动相冲洗系统，一般最少需6倍柱体积的流动相。      2.2 ：检查各管路连接处是否漏液，如漏液应予以排除。      2.3 ：观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应不超过1MPa。如超过则可初步判断为柱前管路仍有气泡，按检查管路后再操作。      2.4 ：观察基线变化。如果冲洗至基线漂移 0.01mV/min，噪声为 0.001mV时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。 七、   进样 1 、进样前按检测器[zero]键调零，按软件中 [零点校正] 按钮校正基线零点，再按一下 [查看基线] 按钮使其弹起。 2 、用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量即可以进样了。 3、含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少进样2次 。   八、   谱图的判断 及结果计算 系统适用性实验：三个重要指标             ①分离度（加强）：一般应≥1.5。             ②重复性：两次谱图的峰面积应相差不超过1%。             ③理论塔板数：应≥规定的理论塔板数目。                 ④拖尾因子：0.95＜T＜1.05             ⑤保留时间：对照与样品的主成分保留时间应大致一致。             ⑥RSD： ＜3%   八、   谱图的判断 及结果计算  1、内标法 用含对照品和内标物质的对照溶液所得色谱峰响应值，按下式算出校正因子（f）：        其中 As和Ar分别为内标物质和对照品的峰面积或峰高，ms和mr分别为加入内标物质和对照品的量。  八、  谱图的判断 及结果计算  2、外标法：  ①用含对照品的对照溶液所得色谱峰响应值，按下式计算比值（r）：r=mr/Ar（其中 mr和Ar分别为对照品的量和相应的峰面积或峰高。 ） ②再根据供试品溶液的色谱峰响应值，计算供试品中被测成分的含量（mi）：mi=r×Ai（其中 Ai为供试品溶液中被测成分的峰面积或峰高）。 ③必要时，再根据稀释倍数、取样量和标示量折算成标示量的百分含量，或根据稀释倍数、取样量折算成百分含量。      九、   清洗管路及进样口 1、分析完毕后，先关检测器和数据处理机，再用经滤过和脱气的适当溶剂清洗色谱系统，正相柱一般用正已烷，反相柱如使用过含盐流动相，则先用水，然后用甲醇-水冲洗，冲洗前先按（max.book118.com~max.book118.com）操作，再用分析流速冲洗，各种冲洗剂一般冲洗15~30分钟，特殊情况应延长冲洗时间；并且用水冲洗密封圈三次。   九、   清洗管路及进样口 2、 冲洗完毕后，逐步降低流速至0，关泵，进样器也应用相应溶剂冲洗，可使用进样阀所附专用冲洗接头。 3 、关断电源，作好使用登记，内容包括日期、检品、色谱柱、流动相、柱压，使用小时数，仪器完好状态等。   九、   清洗管路及进样口 【特殊情况】：谱流路系统，从泵、进样器、色谱柱、到检测器通池，在分析完毕后，均应按（5.1）充分冲洗，特别是用过含盐流动相的，更应注意先用水，再用甲醇-水，充分冲洗。  谢谢大家！ 第二节   岛津LC-10AT型HPLC注意事项   一、 流动相 1、流动相应选用色谱纯试剂、高纯水或双蒸水，酸碱液及缓冲液需经过滤后使用，过滤时注意区分水系膜和油系膜的使用范围；  2、水相流动相需经常更换（一般不超过2天），防止长菌变质；     二、样品  1、采用过滤或离心方法处理样品，确保样品中不含固体颗粒；  2、用流动相或比流动相弱（若为反相柱，则极性比流动相大；若为正相柱，则极性比流动相小）的溶剂制备样品溶液，尽量用流动相制备样品液；  3、手动进样时，进样量尽量小，使用定量管定量时，进样体积应为定量管的3～5倍；  三、色谱柱 1、 使用前仔细阅读色谱柱附带的说明书，注意适用范围，如pH值范围、流动相类型等；  2、 使用符合要求的流动相；  3、 使用保护柱；  4、 如所用流动相为含盐流动相，反相色谱柱使用后，先用水或低浓度甲醇水（如5％甲醇水溶液），再用甲醇冲洗。   三、 色谱柱 5、 色谱柱在不使用时，应用甲醇冲洗，取下后紧密封闭两端保存；  6、 不要高压冲洗柱子；  7、 不要在高温下长时间使用硅胶键合相色谱柱；      使用过程中注意轻拿轻放。  四、操作过程  1、 开机操作： （1）、打开电源，用Harb相连接时，注意Harb电源，打开计算机，打开Bootp Server（一般启动时已打开）；  （ 2 ）、自上而下打开个组件电源，Bootp Server里显示有信号时（有六行字符），打开工作站（先打开On line）；   （3）、打开冲洗泵头的10％异丙醇溶液的开关（需用针捅抽），控制流量大小，以能流出的最小流量
岛津LC-10AT型HPLC操作规程2.ppt