温度对发酵的影响: 2) 影响发酵pH变化的因素: 3) 最适pH的选择 4) pH的控制 补糖量的控制: 根据经验,以最高产量的罐批的加糖率为指标,并依据 菌体浓度、一定时间内的糖比消耗速率和残糖等加以修正。 例: 青霉素发酵开始补糖在残糖降至1.5%, pH开始回升时补糖。补 糖量以最高罐批经验量为参考。 每小时 前期0—40h 中期40—90h 后期90以后 加糖量 0.08%-0.15% 0.15% - 0.18% 0.15% -0.18% 发 酵 控 制 Fermentation Control Sample Analysis pH DO Sugar Ammonia Phosphate Sulphate Products Precursors Contamination Pressure probe Level probe pH probe Temp. probe DO probe Antifoam Acid/Base Cooling Air/agitation Sugar/Oil feed 过程及工艺控制 过程及工艺控制 影响各种酶促反应的速度 酶活 温度 发酵温度升高,生长代谢加快,生产期提前。 发酵温度太高,菌体容易衰老,发酵周期缩短。 改变发酵液的物理性质: 温度影响基质和氧的吸收速度 影响饱和溶氧浓度 改变菌体代谢产物的合成方向 例:温度小于30℃,合成金霉素的能力强 温度等于35℃,只合成四环素 3. 2 物理参数的检测与控制 1、温度的检测与控制 发酵热 = 生物热 + 搅拌热 - 蒸发热 - 显热 - 辐射热 生物热:产生菌在生长繁殖过程中,释放的大量热量。 影响生物热的因素: 与菌种遗传特性有关 与菌龄有关:对数生长期生物热最大。 与营养基质有关 与产量有关 搅拌热:由于搅拌器的转动引起液体的摩擦产生的热量。 蒸发热:发酵液蒸发水分带走的热量。 显热:发酵排气散发带走的热量。 辐射热:由于罐内外的温差,辐射带走的热量。 Q发酵=Q生物+Q搅拌-Q蒸发-Q显热-Q辐射 1)影响发酵温度变化的因素:发酵热 选择最适温度并严格控制,既适合菌体生长又适合代谢产物合成的温度。 不同菌种:不同温度。 两段变温发酵培养:生长阶段,选择适宜的菌体生长温度,生产阶段选择最适宜的产物生产温度。 后期降温控制:避免产物降解。 2)温度的选择原则 过程及工艺控制 (3)温度的控制方式 一般不需要加热,往往经常需要降温冷却 夹套层、蛇形管,热交换;电热缛 冷却水降温:滞后,需要一定的经验和技巧 冷冻盐水循环式降温:迅速 建立冷冻站:提高冷却能力 过程及工艺控制 2、压力的检测与控制 概念:罐体内的压力,由压力表读出。 罐压的影响:维持正压,防止污染;影响CO2和O2的溶解度 不同生物对压力耐受不同 控制:进或出口阀门,进入或排出气体或空气流量 维持工艺所需压力:0.02-0.05 MPa 过程及工艺控制 3、搅拌的检测与控制 搅拌的影响: 气体的传递速度和发酵液的混合均匀程度 搅拌指标:搅拌转速和搅拌功率。 搅拌控制策略: 发酵中不同阶段对氧需求进行调节。 过程及工艺控制 基质浓度 pH 溶解氧 尾气 3. 3 化学参数的检测与控制 过程及工艺控制 基质代谢 糖代谢 氮代谢 生理酸碱性物质利用后pH会上升或下降 产物形成 菌体自溶 1、 pH检测与控制 发酵过程中pH波动的原因 过程及工艺控制 1) pH对发酵的影响: 影响菌体生长代谢的酶活性 影响代谢产物的合成方向 影响菌体原生质膜电荷的改变,引起膜对离子的渗透作用,影响了营养物的吸收和代谢产物的分泌。 酶活 pH pH的变化决定于所用的生产菌 培养基中营养物质的代谢引起pH的变化: 培养基pH在发酵过程中能被菌体代谢所改变。若阴离子氮源被利用 后产生NH3 ,则pH上升;有机酸的积累,使pH下降。 一般来说,高碳源培养基倾向于向酸性pH转移,高氮源培养基倾向 于向碱性pH转移,这都跟碳氮比直接有关。 生理酸性物质和生理碱性物质的消耗 根据不同菌种的生理特性,确定不同的最适pH 同一菌种根据不同阶段,生长期采用最适生长的pH, 在产物采用最适产物合成的pH。 pH对菌体生长影响比产物合成影响小 青霉素:菌体生长最适pH3.5~6.0,产物合成最适pH7.2~7.4 四环素:菌体生长最适pH6.0~6.8,产物合成最适pH5.8~6.0 生长 合成 X pH 四环素 生理酸性物质和生理碱性物质比例合适 添加缓冲物质:碳酸钙和磷酸盐 在发酵过程中直接补加酸或碱 过去流加硫酸或氢氧化钠, 现采用补加氨水、尿素、硫酸铵 在发酵过程中调节补糖速度控制pH 采用合适的培养基配比,C:N合适 基质浓度:发酵液中糖、氮、磷等发酵液中营养物质的浓度 检测:在线或离线。 2、基质浓度 过程及工艺控制 种类:葡萄糖 优点: 吸收快,利用快,能迅速参加代谢合成菌体和产生能量 缺点: 有些品种产生分解产物 阻遏效应。 种类:淀粉、乳糖、蔗糖、麦芽糖、玉米油 优点: 不易产生分解产物 阻遏效应。 有利于延长次级代谢产物的分泌期 缺点:溶解度低,发酵液粘度大。 迅速利用的碳源 缓慢利用的碳源 发酵工业中常采用含迅速利用的碳源和缓慢利用的碳源的混合碳源。 迅速利用的碳源满足菌体生长的消耗,缓慢利用的碳源,满足产物合成,可延长合成期,提高产量,并可解除葡萄糖效应。 碳源种类的控制 概念:溶于培养液中的氧含量 表示:绝对含量,饱和氧浓度的百分数。 检测:在线溶氧电极。 控制策略:供应量和需要量二个方面考使之需氧不超过设备的供氧能力。 3、溶解氧的检测与控制 过程及工艺控制 废气中的氧含量和细胞的摄氧速率有关 二氧化碳为细胞呼吸产生并释放出 细胞的摄氧速率、呼吸速率和发酵罐的供氧能力。 4、废气检测与控制 过程及工艺控制 概念:气体分散在少量液体中,气体与液体之间被一层液膜隔开就形成了泡沫。 3. 4 泡沫检测与控制 过程及工艺控制 1、泡沫形成的原因 气液接触 气液接触大致有以下两类情况: (1)气体从外部进入液体,如搅拌液体时混入气体 (2)气体从液体内部产生,此时形成的泡沫一般气泡较小、较稳定。 含助泡剂 不纯净的水产生泡沫,其寿命在0.5秒之内,只能瞬间存在; 摇荡纯溶剂不起泡,如蒸馏水,只有摇荡某种溶液才会起泡。 过程及工艺控制 2、发酵过程中泡沫形成的原因 2.1 通气搅拌的程度 通气大、搅拌强烈可使泡沫增多,反之则少。 发酵前期由于培养基营养成分消耗少,培养基成分丰富,易起泡。 应先开小通气量,再逐步加大。搅拌转速也如此。 也可在基础料中加入消泡剂。 过程及工艺控制 2、发酵过程中泡沫形成的原因 2.2 培养基配比与原料组成 培养基营养丰富,黏度大,产生泡沫多而持久,前期难开搅拌。 如在50L罐中投料10L,成分为淀粉水解糖、豆饼水解液、玉米浆等,搅拌900 rpm,通气,泡沫生成量为培养基的2倍。 如接种量大一些,生长速度快些,前期就容易开搅拌。 过程及工艺控制 2、发酵过程中泡沫形成的原因 2.3 菌种、种子质量和接种量
第五章 微生物发酵及.ppt
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