黄   曲   霉   毒  素  B1


酶 联 免 疫 检 测 试 剂 盒 使 用 说 明 书













Ⅰ．样品处理方法
食品
1、脂肪含量小的固体样品（如大米、玉米、小米等）称取5.0g样品（已粉碎）于100ml具塞三角瓶中，准确加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，振摇15min，过滤，弃去1/4初滤液，收集试样滤液，根据样品的国家允许量标准，用A试剂将滤液进行稀释（见表1：样品稀释表）。将样品稀释液进行定量或限量测定。
酱油、醋
称取5.0g样品于25ml小烧杯中，用5ml蒸馏水将试样转移到125ml分液漏斗中， 加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中，65℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入25.0ml甲醇水（1+1），将蒸发皿中的凝结物充分溶解。根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。
将样品稀释液进行定量或限量测定。
食用油（如菜油、麻油、色拉油、花生油等）
称5.0g油样于25ml小烧杯中，用20ml石油醚或正乙烷分次将试样转移至125ml分液漏斗中，准确加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，加塞轻轻振摇5min，静置分层，放出下层甲醇水提取液。根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释
（见表1：样品稀释表）。将样品稀释液进行定量或限量测定。
4、葡萄酒
      准备称取5.0g葡萄酒于125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中， 65℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入25.0ml甲醇水（1+1），将蒸发皿中的凝结物充分溶解。根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。将样品稀释液进行定量或限量测定。
5、啤酒、黄酒
      准确吸取5.0ml样品于25ml容量瓶，准确加入12.5ml甲醇，再用蒸馏水定容至25ml。振摇10min，此即为待测样品液。将待测样品稀释液进行定量或限量测定。
      若结果为阳性，则采用葡萄酒中AFB1的提取方法进行测定。
6、花生
      样品去皮粉碎（刀切或剪切），称取5.0g于100ml具塞三角瓶中。加入25.0ml甲醇水（1+1）和20ml正乙烷（或石油醚），振摇10min，过滤于分液漏斗中，静置分层。放出下层提取液，根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：
样品稀释表）。将样品稀释液进行定量过限量测定。
7、月饼、桃酥、花生酱等
      称取10.0g试样于125ml具塞锥形瓶中，加入50.0ml甲醇水（1+1）提取液和20ml正乙烷（或石油醚）加塞震荡15min，过滤，收集滤液于分液漏斗中，静置分层。待下层甲醇水溶液澄清后，放出甲醇水溶液于另一锥形瓶中。准备吸取10.0ml甲醇水提取液（相当2.0g样品）于125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中，65℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入10.0ml甲醇水（1+1），将蒸发皿中的凝结物充分溶解。根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。将样品稀释液进行定量或限量测定。
8、面粉
   称取10.0g面粉样于100ml具塞三角瓶中，准确加入50.0ml甲醇水（1+1）溶液，震荡15min ,过滤，收集试样滤液。准确吸取10.0ml滤液（相当于2.0g样品）125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷层，加塞轻轻振摇3min，静置分层。放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中， 65℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入10.0ml甲醇水（1+1），将蒸发皿中的凝结物充分溶解。根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。
    将样品稀释液进行定量或限量测定。

   二、  饲料
1、一般饲料及原料
称取5.0g样品于100ml具塞三角瓶中，准确加入25.0ml甲醇水（1+1）溶液，振荡15min，过滤，弃去初滤液。收集滤液。根据样品的国家允许量标准，用A试剂将滤液进行稀释（见表1：样品稀释表）。
    将样品稀释液进行定量或限量测定。
2、饲料浓缩料
称取10.0g样品于100ml具塞三角瓶中，准确加入50.0ml甲醇水（1+1）溶液，振荡15min,过滤，收集试样过滤。
准备吸取10.0ml甲醇水提取液（相当2.0g样品）于125ml分液漏斗中，加入20ml三氯甲烷，加塞轻轻振摇3min，静置分层。
放出下层三氯甲烷层，经盛有约5g预先用三氯甲烷湿润的无水Na2SO4过滤器于100ml蒸发皿中，再加5ml三氯甲烷于分液漏斗中，重复振摇提取，三氯甲烷层一并滤于蒸发皿中，最后用少量三氯甲烷洗涤过滤器，洗液并于蒸发皿中，65℃水浴通风挥干。挥干冷却后，准确加入10.0ml甲醇水（1+1），将蒸发皿中的凝结物充分溶解。根据样品的国家允许量标准，用A试剂将提取液进行稀释（见表1：样品稀释表）。
    将样品稀释液进行定量或限量测定。
样品稀释表
表1 样品稀释表
样品允许量（μg/kg）	样品提取液（ml）	A试剂（ml）	样品稀释倍数（D）		≤5	直接量取	0	1		≤10	0.1	0.1	2		≤15	0.05	0.2	3		≤20	0.05	0.15	4		≤30	0.05	0.25	6		≤50	0.05	0.45	10		    
Ⅱ.黄曲霉毒素B1测试盒使用说明书
（定量检测）
  本测试盒利用固相酶联免疫吸附（ELISE）原理，通过抗黄曲霉毒素B1抗体与酶标抗原、待测抗原的竞争免疫反应以及酶的催化显色反应相结合来检测AFB1，适用于食品、饲料及相关原料中AFB1的定量检测，特点是灵敏度高，特异性好，操作简便，结果易判读。
测试盒组成
1、包被抗体的反应板：                         48/24/12孔
2、A试剂：样品稀释液                         1瓶
3、B试剂：AFB1标准溶液                      1套（0.1，0.5，1.5，10ng/ml）
4、C试剂：酶标抗原                          
黄曲霉毒素试剂盒说明书.doc