广 东 省 农 田 鼠 类 抗 药 性 监 测 地 点  农田害鼠对第一代抗凝血剂的抗药性监测结果 地点 鼠种 致死剂量 (mg/kg) 存活剂量 (mg/kg) 死亡天数 （d） 抗性率 （％） 广州番禺区 黄毛鼠 12.47 17.12 11.5 33.33 江门新会区 黄毛鼠 12.83 16.41 12.0 36.67 佛山高明区 黄毛鼠 9.07 13.49 8.3 16.67 湛江遂溪县 黄毛鼠 7.60 14.15 7.9 3.33 汕头澄海区 黄毛鼠 10.96 － 7.6 0.0 清远清新县 黄毛鼠 11.45 － 7.9 0.0 韶关翁源县 黄毛鼠 10.57 － 7.3 0.0 梅州兴宁市 黄毛鼠 9.86 － 7.3 0.0 湛江雷州市 板齿鼠 0.11－5.7 － 8.3 0.0 湛江廉江县 黄胸鼠 98.45 154.3 7.7 10.4   致死期食毒法(LFP)法  血凝反应法(BCR法)  基因检测法  四、鼠类抗药性检测方法  致死期食毒法(LFP法)              抗药性测定的标准药物：杀鼠灵毒饵.    杀鼠灵标准品：纯度99％，熔点159－162℃.    食毒期：WHO推荐的98%或99%敏感靶标鼠种的食毒期(LPF98/LPF99)的95%置信上限取整数天。      研究不同鼠种对抗凝血灭鼠剂的敏感基线并确定LPF99，是采用LFP法检测抗性的重要基础 褐家鼠0.005％ 黄胸鼠0.05％ 小家鼠0.05% 黄毛鼠0.002％；   板齿鼠0.002％； 黑线姬鼠0.005％； 长爪沙鼠0.005％； 大足鼠0.025%；    达乌尔黄鼠0.05％。   毒饵浓度：   靶鼠室内单笼饲养适应1周，选择成年、健康、非孕个体进行试验。  用食盒供给无毒诱饵2d，第2d吃饵不及全部试鼠平均摄食量20％的个体淘汰。  褐家鼠饲喂6d标准毒饵、黄胸鼠9d、小家鼠11d、黄毛鼠9d，每天称毒饵消耗量，第1天吃毒饵不及前一天无毒饵的10％的个体淘汰。  攻毒期结束后，试鼠正常饲养观察：褐家鼠20d、黄胸鼠25d、黄毛鼠20d、小家鼠30d。试验期间产仔或无出血体征的死鼠淘汰。   检测步骤   抗药性个体:  (1) 试验期结束仍存活；  (2) 存活者摄药剂量(mg/kg) 达到：褐家鼠12、      黄胸鼠143、小家鼠338、黄毛鼠10.  抗药性种群:   (1) 试验样本至少20只，抗性发生率达15％；  (2) 样本的总平均摄药剂量(mg/kg)达到：褐家      鼠12、黄胸鼠143、小家鼠338、黄毛鼠10.   抗药性判别标准   技术简单(笼养，毒饵给药)； 耗时耗力，工作量大； 有一定误差. 野外条件下有的害鼠有一定的耐受性或对毒饵的选择作用而存活下来，但是当处于实验检测时却有可能死掉而被归于敏感鼠； 缺乏人道.   致死期食毒法的特点     抗凝血剂的作用靶标是维生素k环氧化还原酶（VKOR），通过阻断VK的循环利用，使凝血因子合成受阻，无法完成正常的凝血过程而发生致命的大出血。VKOR活动度是检测鼠类抗药性的主要指标。   血凝反应法(BCR法)              BCR法的技术原理     抗凝血剂对VKOR活动度的影响采用血凝时间长短来衡量,转换成凝血活度(PCA)或INR值。     鼠类摄入抗凝血剂后，通过抽取血样检测凝血活度(PCA)或INR值，计算抗凝血剂对VKOR活动度的抑制率，即可区分该鼠的抗药性情况。    C.Bailey等发展了一种微量血样本BCR法，通过从尾部取血大大减小了对鼠的伤害及测试成本.    杀鼠灵抗性鼠标准: VKOR抑制率低于82.5% (Martin等,1979)；  溴敌隆和鼠得克抗性鼠个体标准：VKOR抑制率低于87.5% (Pelz等,1993)；  抗性种群的标准：VKOR活动度大于敏感种群的活动度17.5%.    抗性鼠、抗性种群的划分标准    测试抗凝血药物对靶标鼠种的BCR基线.   BCR法的检测路线    靶标鼠摄入抗凝血剂前后抽取血样.   检测抗凝血剂对靶标鼠的凝血指标.   计算抗凝血剂对靶标鼠VKOR活动度的抑制率，    评价其抗性状况.  增加了检测的可重复性和准确性。 BCR法不受动物取食行为影响，试鼠也可以饲养后再进行确认检测.  快速而且合乎人道。  便于进行地域间、药物间和种间的不同抗性水平的比较.  是一种相对成熟的抗性检测方法。BCR法对杀鼠灵、鼠得克、溴敌隆等都被证明是可行的.  花费大。BCR法需要抗凝血剂处理及取血样进行检测.   BCR法的特点    基因检测法                  基因检测法通过检测抗凝血剂抗性控制基因的突变情况来判别抗性发生状况，是目前最为准确和快捷的检测方法.      从鼠上取一小块组织甚至排泄物得到其DNA，就可以通过检测抗性突变基因来判别抗性.    找到了褐家鼠和小家鼠抗性的一些VKOR基因突变位点，实现了部分地区小家鼠、褐家鼠的杀鼠灵抗性基因检测（Rost等，2004）。   开展基因检测抗性的前提是要明确抗性鼠基因的特异性突变位点。 已发现的鼠类抗性突变基因(from Pelz et al. 2005) Strain/Area 密码子 位置 野生型 密码子 突变型 密码子 野生型 氨基酸 突变型 氨基酸 褐家鼠 英国汉普郡 120 CTG CAG 亮氨酸 谷氨酸 英国波克夏郡 120 CTG CAG 亮氨酸 谷氨酸 苏格兰 128 CTG CAG 亮氨酸 谷氨酸 威尔士 139 TAT TCT 酪氨酸 丝氨酸 英国约克郡 139 TAT TGT 酪氨酸 半胱氨酸 英国约克郡 128 CTG CAG 亮氨酸 谷氨酸 丹麦 139 TAT TGT 酪氨酸 半胱氨酸 德国 139 TAT TGT 酪氨酸 半胱氨酸 小家鼠 英国雷丁 139 TAT TGT 酪氨酸 半胱氨酸 Arg58Gly   初步明确了广东省江门市黄毛鼠对杀鼠灵抗性的特异性基因突变位点：第58位精氨酸（Arg）突变成甘氨酸（Gly）. 五、鼠类抗药性的应对策略与技术措施   树立持续控害理念，开展综合治理.   开展抗性检测技术研究与发生动态监测.   科学灭鼠，延缓抗性的产生速度.   合理用药，防止抗药性的进一步扩散. 生态治理 ? 鼠情监测 提高死亡率 化学灭鼠 器械灭鼠 天敌控鼠 不育控制 控制鼠密度 降低出生率    鼠害持续治理技术模式     加强监测，健全鼠情监测网络.     延缓鼠类产生抗药性的化学灭鼠对策与技术     应用防治阈值指导灭鼠行动，在必要时才开展化学灭鼠.       采用一役达标的灭鼠对策，在防治适期集中人力和药物进行全面灭鼠.       加强灭鼠的组织领导，开展“五统一”灭鼠行动.   不同灭鼠次数对害鼠密度的控制效果    慎用第二代抗凝血灭鼠剂，未产生抗药性的地区建议继续使用第一代抗凝血剂灭鼠.     宜采用低浓度、饱和投放的方式进行灭鼠.      可利用抗凝血增效剂来降低杀鼠剂的使用浓度，对提高灭效、延缓行为抗性和维护生态安全有重要作用.     采用毒饵站和前饵技术，提高毒饵的取食率，降低鼠类的行为抗性.    A处理：一次饱和投放；B处理：每天更换毒饵 投饵方式对毒饵取食率的影响   
鼠类抗药性的监测方法与治理技术081106.ppt