MM_FS_CNG_0785饲料添加剂 维生champ-ec8620-2000素A／D3微粒 检验规程 称量法 比色法 分光光度法 高压液相色谱法

MM_FS_CNG_0785
饲料添加剂维生素A／D3微粒

1.适用范围
本方法适用于以维生素A乙酸酯原油与含量为130万IU/g以上的维生素D3原油为原料，配以一定量BHT及乙氧喹啉作稳定剂，采用明胶和淀粉等辅料，经喷雾法制成的微粒，每克含维生素A乙酸酯(C12H32O2)和维生素D3(C27H44O)之比为5:1，其含量应为标示量的85%以上，本品的饲料工业中作为维生素饲料添加剂。
2.产品规格(标示量)
2.1.VA50万IU/g,10万IU/g；
2.2.VA40万IU/g，8万IU/g；
3.技术要求
3.1.外观和性状
本品为黄色或棕色微粒，遇热，见光或吸潮后易分解、降解，使含量下降，在40℃水中，成乳化状。
3.2.项目和指标
项               目	指               标
含量，标示量的%	85.0～102.0
颗粒度，通过2号筛%	100.0
干燥失重，%	≤5.0
4.过程简述
4.1.主要试剂
无水乙醇；
三氯甲烷(氯仿)；
三氯化锑；
三氯化锑氯仿溶液：取三氯化锑1g加氯仿4mL溶解即成。.
乙酸酐；
硫酸；
95%乙醇；
氢氧化钾；
50%(W／W)氢氧化钾溶液：取氢氧化钾与水1:1混合溶解摇匀即成；
0.5mol/L乙酸制氢化钾液：按中国药典1985年版二部附录128页制备；
抗坏血酸；
1mol/L氢氧化钠液：按中国药曲1985年版二部附录130页制备；
抗坏血酸钠溶液：取3.5g抗坏血酸，溶解于20mL 1mol/L氢氧化钠液中即成；
乙醚；不含过氧化物。按中国药典1985年版二部附录56页制备；
碱性洗涤液：取1份0.5mol/L乙醇制氢氧化钾溶液，8份水，1份95%乙醇混匀即成；
酚酞；
酚酞指示液：取酚酞1g ,加95%乙醇使成100mL即成；
异丙醇：光学纯；
正戊醇；
正已烷；优级纯；.
甲醇：色谱纯；
乙腈：色谱纯；
BHT(2,6－叔丁基-4-甲基苯酚)；
维生素D3标准品(卫生部发布)；
对-二四氨基苯甲醛 (用做内示物)；
维生素D3标准贮备液：称取维生素D3标准品20mg，(称准至0.0002g)于100mL棕色量瓶中，加正已烷及数粒BHT溶解并稀释至刻度，摇匀；
内标贮备液：取内标物0.2g (称准至0.0002g)于100mL棕色量瓶中，加5mL无水乙醇溶解，并用正已烷释至刻度，摇匀；
内标分析液：准确吸取2mL内标贮备液并用正已烷烯释至100mL，摇匀；
丙三醇(甘油)；
可溶性淀粉；
甘油淀粉润滑油：取甘油22g，加入可溶性淀粉9g，加热至140℃保持30min，并不断搅拌，放冷即得。
4.2.仪器
实验室一般仪器和设备
筛网：孔径850±29μm(2号筛)；
旋转蒸发器；
紫外分光光度计；
高压液相色谱仪。
4.3.鉴别试验
4.3.1.称取本品100mg用无水乙醇湿润后，在研钵中研磨数分种，加氯仿10mL搅拌、过滤、取溶液2mL于试管中，加三氯化锑氯仿溶液0.5 mL,即显蓝色，并立即褪色(VA)。
4.3.2.称取本品100mg，加氯仿10mL研磨数分钟过滤，取滤液5mL，加乙酸酐0.3mL，硫酸0.1mL，振摇，初显黄色，渐变红色，迅即变为紫色，最后呈绿色，(VD3)。
4.4.颗粒度检查
取本品适量倾入筛网中，适当振摇，应100%通过。
4.5.干燥失重
4.5.1.测试方法
称取本品1g，(称准至0.0002g)置于已干燥至恒重的称量瓶中，置电热恒温箱中，保持105℃干燥至恒重，减失重量，不得超过5.0%。
4.5.2.计算和结果的表示
样品干燥失重按式(1)计算：
 
式中：X──样品干燥失重率，%；
G1──干燥前的样品加称量瓶重量，g；
G2──干燥后的样品加称量瓶重量，g；
G──样品的重量，g。
4.6.含量测定
4.6.1.样品前处理
称取样品适量，使含维生素A乙酸酯10万国际单位(称准至0.0002g)，置皂化瓶中；
加95%乙醇20mL，20%抗坏血酸钠溶液(临用新配)5mL，50%氢氧化钾溶液(临用新配3mL，置90℃水浴回流30min，迅速冷却)；
自冷凝管顶端加水2×15mL，冲洗冷凝管的内壁，将皂化液移至500mL(甲)分液漏斗中(分液漏斗活塞涂以甘油淀粉润滑剂)；
皂化瓶用2×15mL水，2×10mL乙醇清洗，皂化瓶洗液并入(甲)分液漏斗中；
(甲)分液漏斗用不含过氧化物的乙醚2×50mL振摇30s，静置，分层，把水层转移至250mL(乙)分液漏斗中；
水层用10mL乙醇，50mL乙醚，振摇30s静置，分层。把水层转移至皂化瓶中，把乙醚层转移至(甲)分液漏斗中，用2×10mL乙醚洗涤(乙)分液漏斗，洗 液合并在(甲)分液漏斗中；
把水层再转移到(乙)分液漏斗中，用50mL乙醚提取一次，弃去水层，乙醚层再并入(甲)分液漏斗中；
合并后的乙醚液用2×50mL碱性洗涤液洗涤，振摇，静置分层，弃去水层；
乙醚液用每次50mL水洗涤，直至洗涤液遇酚酞液不显红色为止；
将乙醚层放入250mL量瓶中，用适量乙醚洗涤(甲)分液漏斗，洗液并入量瓶，用乙醚稀至刻度并摇匀。
4.6.2.维生素A乙酸酯含量测定
4.6.2.1.测定方法
准确量取2mL乙醚液于100mL量瓶中，迅速加入异丙醇溶解，并稀释至刻度，使成每毫升中含维生素A乙酸酯10～15国际单位，摇匀。用紫外分光光度计测定，以1cm石英比色皿，在300nm、310nm、325nm、334nm四个波长处测定其吸光度，并测定吸收峰的波长。最大吸收峰的波长应在323～327nm之间，且300nm波长处的吸光度与325nm波长处的吸光度的比值应不超过0.73。
4.6.2.2.结果计算
按GB 7292第3.4项表示。
4.6.3.维生素D3含量测定。
4.6.3.1.高压液相色谱分离VA、VD；
4.6.3.1.1.测试条件
高压液相色谱仪；
紫外检测器：波长254nm；
分离柱：C8硅胶柱；UBONDAPAK C8μm；
流动相：甲醇:乙腈:水=200:200:35(水量可适当调节，使VD3的Rt约7min)；
流速：1.5mL/min；
灵敏度：1.0AUFS；
4.6.3.1.2.分离方法
a. 试液的制备：吸取4.6.1项下的乙醚液50mL于100mL皂化瓶中，加1mL内标贮备液，数粒抗氧剂(BHT)，置于旋转蒸发器上，保持60℃真空蒸发至干，准确加入甲醇:乙腈=1:1的溶液5mL溶解残留物；
b.操作：进a项供试液500mL于分离柱，收集5～9min(可根据具体情况而定)流出液，于50 μL皂化瓶中，加数粒抗氧剂(BHT)，装于旋转蒸发器上60℃真空蒸发至干，冷却。准确加内标分析液5mL，溶解待测。
4.6.3.2.测定方法
4.6.3.2.1.测试条件
高压液相色谱仪；
紫外检测器：波长254nm；
分析柱：硅胶柱Lichrosorb Sibo 5 μm；
流动相：正已烷:正戊醇=1000:3；
流速：2.
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