中药药理学实验讲义成都中医药大学药学院药理2005，12
中药药理学实验讲义 主编曾南 主审沈映君 编委
  曾南王平徐世军谢宇环  王张杨旋熊静悦杨莉娟  童妍周桢昊李佳川第一章中药药理实验基本知识一、中药药理实验报告基本要求1.实验前应仔细阅读实验指导，做到心中有数。结合实验内容，复习有理论知识。科研实验还应查阅有关文献资料，吸取他人经验。实验中应认真、仔细、耐心地观察所出现的各种现象，实事求是记录，切忌夹杂主观因素。应坚持一丝不苟，严谨的科学作风，决不允许抄袭别人的实验结果写报告。  2.教学实验往往每次是取一种动物,一种方法写实验报告。科研实验则应事先设计好实验动物数，随机分组。新药研制还应设空白与已知药物对照组。科研实验要说明的某一个作用，至少设2～3个以上计量组，要两种以上的实验方法等。  3.实验条件应详细、明确，如仪器型号、试剂的浓度、中药的品种、复方的组成、提取方法、浓度和剂量、给药途径、动物的来源、品种、体重、年龄、性别、如何分组等都应写出。  4.实验方法可简明扼要地叙述，但关键环节必须写清楚。科研报告还可以引用文献上的方法，以节省文字。  5.实验结果应根据实验获得的数据进行整理，对一个教学实验小组或全实验室的数据进行整理、归纳、分析和对比，尽量总结出各种图表，进行统计学处理。  6.讨论部分包括实验结果的分析、思考题的探讨、实验设计、实验方法及实验中出现异常现象的分析、认识、体会和建议等。讨论应注意结合中医药理论。科研报告还可对比前人的实验进行分析，阐明从本实验获得的新发现或尚存在问题。  7.实验结束应及时地整理和总结实验结果，写出报告。实验报告内容应包括实验名称、目的、原理、材料（包括仪器、药品、动物）、方法、结果、讨论及结论。科研实验报告还应有前言，说明课题来源及本实验要解决的问题；报告后应附有参考文献。二、中药药理实验样品注意事项在进行单味中药或复方中药药理实验时，由于中药不同于西药，多数不是单一化学成分，而是多种成分的综合作用或多种中药的综合作用。因此，在有效成分不明确的情况下，制备药理实验用的中药样品，应注意多种因素的干扰，影响实验结果。1.药材选择：中药品种、产地、采收季节、炮制加工、霉变虫蛀等多种因素可以影响重要药理作用的实验结果，所以制备中药制剂应首先对中药样品经过鉴定，选择合格中药材进行制备。如果是研究中药新药，受试药物应是处方固定，生产工艺及质量稳定，与临床研究用药剂型相同，并应符合临床用药的质量标准。  2.口服制剂：整体动物实验口服或十二指肠给药，对药材加工的中成药制剂，如冲剂、浸膏、丸、丹、片剂等，可用蒸馏水或生理盐水配制成水溶液剂、混悬剂，必要时可加入增溶剂和助悬剂。糖衣片可先剥除包衣再配制。含挥发油的药材应先蒸馏取得挥发油，然后助溶或制成乳剂、混悬剂进行动物实验。若含有麝香、牛黄之类不便提取加工的药材，可直接和水煎液配制成混悬液给药。药效学研究  3.离体实验和静脉注射：对于离体实验和注射给药的中药制剂，进行药效学研究时，用不含赋形剂的提取物，应注意药物中的杂质、不溶物质、无机离子及酸碱度对实验的干扰。如制剂中含钙离子进行心脏强心试验，含钾离子进行离体心脏和平滑肌试验，含糅质进行局部止血试验和抗菌试验，含胆碱、腺苷、鞣质、和无机离子静脉注射进行血压试验和血流动力学试验，获得阳性结果应持谨慎态度，常常不能反映药物的真实作用，可能为假阳性结果。因此，最好经过提取和处理。例如为防止阳离子干扰，提取物可通过阳离子树脂处理。必要时可提取有效部位或有效单体进行试验。血管内注射如用乳剂实验，乳剂为油/水型分散相粒子直径不能大于4μm。油性注射剂，混悬剂则不可静脉给药。脑室和脊椎腔（椎管）注射用注射剂必须以纯水为溶媒，不能加入任何助溶剂及抑菌剂。眼用混悬剂药物微粒不能大于50μm。一些药理实验为了除去供试药物中的鞣质、树脂、淀粉及其它杂质，水提取物加入高浓度的乙醇进行沉淀处理，注意这样同时也除去了多糖和蛋白质，如果进行免疫试验时，可能是该被试药物的有效成分。最好是根据中药含有不同的有效成分，采用不同的提取方法和处理方法，制备药理试验样品。  4.特殊成分处理：如果要研究某中药的多肽、蛋白质、酶、糖蛋白和其它不稳定成分的药理作用，则需要在低温下制成被试药物或制成冻干剂。临用时加注射用水或生理盐水进行实验。 中药样品制备和配制的具体方法，可参考陈奇主编的中药药理研究方法学（人民卫生出版社，1993年）以及其它中药化学、中药药剂学参考书。三、中药药理实验制剂的浓度表示法中药单味和复方制剂，一般以生药量浓度表示法。中药制剂名称在前，浓度在后，通常以g/ml表示液体制剂，以g/g 表示固体制剂。如生附子水煎液0.125 g/ml表示每毫升制剂中相当于喊生附子量为0.125g,人生总皂甙25mg/片表示每片中含人参总皂甙25mg。四逆汤水煎液3g/ml（附子9g、干姜9g、甘草12g，煎成10ml），表示每毫升制剂含有四逆汤总量的3g。对分子量已经明确的有效单体可用mol/L浓度表示。四、常用实验动物的选择、捉持和给药方法药理实验常用的动物有小白鼠、大白鼠、豚鼠、家兔、猫和犬，某些实验还可以用青蛙、蟾蜍以及鸽、鸡、猴等。由于各种试验的观察目的和内容不同，对动物的选择也有不同。下面介绍几种常用动物的选择、捉拿固定法和给药途径。（一）小白鼠小白鼠是药理实验常用的一种动物，常用于药物的筛选、LD50ED50的测定、中枢神经系统药试验、抗炎免疫药试验、避孕药、抗肿瘤以及抗衰老药试验等。常用体重18～22g。 1．捉拿方法右手提起鼠尾，放在粗糙物（如鼠笼）上面，轻向后拉其尾，用左手拇指和食指捏住其头部皮肤及双耳，将小白鼠固定在掌中，使其腹部朝上，然后以第四指和小指夹住鼠尾。 2．给药途径：（1）经口给药法：口服（PO）：将受试药物放入饲料或溶于饮用水中，由动物自由提取的一种方法。缺点是摄入剂量不够准确。灌胃(IG)：将小鼠固定后，右手持装有灌胃针头的注射器，自口角插入口腔，沿上腭插入食道。如遇阻力，可将针头抽出再另插，以免穿破食道或误入气管。灌注量为0.1~0.3ml/10g体重。（2）皮下注射(SC)：常在背部皮下注射。一手固定动物，另一手注射，注射量为0.1~0.3ml/10g体重。（3）肌内注射(IM)：多注射于后肢股部肌肉，每侧不超过0.1ml.
（4）腹腔注射（IP）：左手固定小鼠，右手持注射器，从下腹部外侧进针约3~5mm，呈450角刺入腹腔，注射量0.1~0.2ml/10g体重。（5）静脉注射（IV）：将小鼠至于固定筒内，使尾巴露在外面，用70~75%酒精棉球擦尾部，或将鼠尾浸入45~50OC温水中。待尾部左右侧静脉扩张后，左手拉尾，右手进针。注射量不超过0.5ml/只。（二）大白鼠用途与小白鼠相似，常用作抗关节炎药物试验、血压测定、利胆药实验等。常用体重150~200g。 1．捉拿方法：基本上同小白鼠。将其放在粗糙物上，右手轻拉其尾，左手中指和拇指放在大鼠左右前肢腋下，食指放入颈部，使大鼠伸开两前肢，便能将其握住。 2．给药途径：灌胃、腹腔注射、皮下注射、静脉注射均同小白鼠，给药量为小白鼠的2~3倍。（三）豚鼠 豚鼠对组胺很敏感，研究平喘药和抗组胺药时常选用。常用体重300~500g。 1.捉拿方法：豚鼠性温和，不咬人。捉拿是以拇指和中指从豚鼠背部伸入腋下，另一手放在臀部，托起即可。