家畜繁殖学 Reproduction in Farm Animals    家畜繁殖学课程组             第八章  配子与胚胎生物工程 Chapter 8 Biotechnologies of Gametes and Embryos 第一节      胚胎移植技术  Section  1     Embryo transfer 第二节      体外受精  Section ２    In vitro fertilization 第三节      克隆技术 Section ３    Animal cloning     第四节     转基因技术  Section ４   Transgenic Animal 第五节     性别控制技术  Section ５    Sex control 第六节     胚胎干细胞的分离培养技术 Section ６   Embryonic stem cells technique 第七节     哺乳动物嵌合体的生产 Section ７   Chimera 第一节  胚胎移植技术  Embryo transfer（ET） 一、概 述 二、胚胎移植的生理学基础与基本原则 三、ET的技术程序 四、ET的实际效果和影响妊娠率的因素 五、ET存在的主要问题 六、ET的发展前景	  ?为了使供体♀多排卵，通常采用超排（superovulation）； ?国外将常规的胚胎移植称为超数排卵胚胎移植或称为多排卵胚胎移植（multiple ovulation and embryo transfer，MOET）； ?目前，用体外生产胚胎（in vitro production, IVP）技术或克隆（cloning）技术等方法也可以生产胚胎，扩大了优质胚胎的来源，降低了ET的成本。 （二） 发展历史 	1890年剑桥大学Walter Heape从一头纯种安哥拉母兔取出2个4细胞胚胎，移植到一头纯种比利时母兔输卵管上端(用同种公兔交配后3h), 结果生出了4只比利时种仔兔和2只纯种安哥拉仔兔。     这一结果说明早期发育的胚胎更换到另一个体的输卵管(或子宫角)内，如果胚胎的发育阶段和所处的环境条件相适应，它完全可以继续正常发育，并成长为一个新个体。 国外胚胎移植技术的发展历史 我国胚胎移植技术的发展历史 二、胚胎移植的生理学基础与基本原则 （一）生理学基础 （二）胚胎移植遵循的基本原则 （三）开展胚胎移植的条件 （一）胚胎移植的生理学基础  1、母畜发情后生殖器官的孕向发育：母畜发情后数日甚至10余日内，生殖系统的变化相同，即在相同的时期，生理状态一致，子宫内的环境相同。(在黄体存在的情况下)     2、早期胚胎的游离状态：在胚胎附植前，胚胎与子宫尚未建立起组织联系。    3、胚胎移植不存在免疫问题：由于胎盘屏障的保护和妊娠时母体免疫机能发生的变化，胚胎可以在受体母畜子宫内存活，正常发育至分娩。  4、胚胎的遗传特性不受受体母畜的影响：胚胎的遗传特性和性别在母畜体内受精时就已经决定了，受体母畜只是给移入的胚胎提供了一个孕育的环境，胚胎的遗传特性不受受体母畜的影响。 三、胚胎移植的技术程序 （一）供体和受体母畜的选择 （二）供体、受体母畜的同期发情 （三）供体母畜的超排 （四）供体母畜的配种 （五）胚胎的收集 （六）胚胎的检查和保存 （七）胚胎的移植    三、胚胎移植的技术程序 （一）供体和受体母畜的选择    1、供体母畜         不仅应具备优良的遗传品质，而且其生殖机能还需要处于较高的水平。牛、猪产后两个月以上才能作为供体。   2、受体母畜         虽不要求具有优良的遗传品质，但应该具有良好的繁殖性能和健康体态，体型中等以上。供体与受体的发情时间应该相同，前后差异不超过1d。必要是时对供、受体进行同期发情处理。  三、胚胎移植的技术程序 （二）同期发情 1、同期发情的定义 定义（Synchronization of estrus）：是对具有正常发情周期的群体母畜采取措施，使之在一定时期内发情并排卵的技术。亦称发情同期化（Estrus synchronization）。 实质：是利用某些激素制剂人为地控制并调整一群母 畜发情周期的进程，使之在预定的时间内集中发情和 排卵，以便有计划地合理地组织配种或进行其他工 作。    2、同期发情的原理： ?黄体期占整个发情周期的大部分长度，也就是说，随机的一群♀，大多数处于黄体期。黄体分泌P抑制卵泡发育成熟和母畜发情。要想使母畜发情，则必须控制P的浓度，即控制黄体的“消”，“长”——即是控制♀发情的关键。 消：缩短黄体期                      PG处理 长： “人为延长黄体期”         P处理  ?卵泡的发育是在黄体退化，P分泌下降后开始的，因此可以通过使用一定的激素，缩短黄体期或“人为延长黄体期”，然后使卵泡于同一时间开始发育，最终使母畜于同一时期发情。 通过缩短和延长黄体期进行同期发情 * * 本章内容 一、概 述  （一）概念    胚胎移植（embryo transfer，ET）：又称受精卵移植，是将体内、或体外生产的哺乳动物早期胚胎移植到同种的生理状态相同的雌性动物生殖道内，使之继续妊娠发育为新个体的技术，也称借腹怀胎。    提供胚胎的个体——供体（donor）    接受胚胎的个体——受体（recipient）   第一节  胚胎移植技术 Embryo transfer 牛胚胎移植技术路线示意图 兔 大鼠 绵羊和山羊 猪 牛 兔 牛   人 牛 首次胚胎移植成功 胚胎移植成功 胚胎移植成功 胚胎移植成功 胚胎移植成功 首次胚胎洲际运输(保存在100C) 经长期冷冻,胚胎移植并产仔  胚胎移植成功 使用卡苏输精器 Heape,1890 Nicholas,1933 Warwick,1949 Kvansnickii,1951 Willett,1951 Marden 和Chang,1952 Whittingham,1972 国际胚胎移植学会成立,1975 Steptoe，1978 Newcomb和Elsden，1979 动物  事例 作者及年代 兔 绵羊 兔 绵羊 兔 奶山羊 奶牛 绵羊 奶山羊 奶牛 奶牛 胚胎移植成功 胚胎移植成功 胚胎低温保存(100C)产仔胚胎低温保存(100C)产犊 -1960C保存胚胎产仔 胚胎移植成功 非手术法胚胎移植成功 -1960C保存胚胎产羔 胚胎分割移植成功 鲜胚分割移植成功 冻胚分割移植成功 陈玉琦,1973 中科院遗传所,1974 中科院遗传所,1976 谭丽玲,郭志勤等,1976 中科院遗传所,1979 王建辰等,1980 王运京等,1980 中国农科院畜牧所,1980 张涌等,1987 谭丽玲,马世援等,1989 郭志勤等,1989 动物  事例 动物 （三）胚胎移植在畜牧生产上的意义 1、充分发挥优良种母畜繁殖潜力，提高种母畜繁殖效率； 2、简化良种引进方法，代替种畜引进； 3、保存品种资源，建立基因库； 4、加速品种改良，扩大良种畜群（MOET育种方案）； 5、利于防疫； ６、作为研究手段。  （二）胚胎移植遵循的基本原则 1、 胚胎移植前后所处环境的同一性：指胚胎移植后的生活环境和胚胎的发育阶段相适应： （1）供体和受体在分类学上的相同属性； （2）供体和受
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