安全性毒理学评价第一节概述一、基本概念安全指一种化学物在规定的使用方式和用量条件下，对人畜不产生任何损害，即不引起急性、慢性中毒，也不至于对接触者及后代产生潜在的危害。安全性毒理学评价安全性毒理学评价(toxicological safety evaluation) 指对人畜所使用化学物质的安全性作出评价的研究过程。即通过对实验动物和人畜的观察，阐明某种物质的毒性及其潜在的危害，对该物质能否投入市场作出取舍的决定，或提出人畜安全的接触条件。二、毒理学安全性评价程序的内容试验前的准备工作文献调研了解受试物的基本资料产品概述化学结构、理化性质、定量分析方法、成分和杂质、原料和中间体使用情况剂量、途径、效益、健康影响受试样品选用人畜实际接触和应用的固定产品，不用纯品，以反映实际接触的情况实验动物多用大鼠安全性毒理学评价程序的阶段划分第一阶段急性毒性试验第二阶段蓄积毒性和致突变试验第三阶段亚慢性毒性试验和代谢试验第四阶段慢性毒性和致癌试验毒性分类一般毒性/基础毒性: 急性毒性（1次或1天之内）蓄积毒性亚急性（2周-1 个月）、亚慢性（10% 动物寿命）和慢性毒性（长期）特殊毒性: 遗传毒性/致突变毒性(基因突变、染色体畸变、染色体分离异常) 生殖发育毒性/致畸毒性致癌毒性免疫毒性神经毒性神经行为毒性致敏毒性三、安全性评价中应注意的问题实验设计的科学性试验方法标准化良好实验室规范(GLP) 标准操作程序(SOP) 熟悉毒理学试验方法的特点评价结论的高度综合性第二节化学物安全性毒理学评价程序一、食品安全性毒理学评价程序 第一阶段急性毒性试验目的了解受试物毒性强度、性质和可能的靶器官为选择进一步毒性试验的剂量和毒性判定指标提供依据试验项目测定经口LD50 7 d 喂养试验动物皮肤、粘膜试验吸入、刺激阈浓度试验联合急性毒性试验结果判定如剂量达每千克体重10 g 仍不引起动物死亡，则不必继续测定以LD50 或7 d 喂养试验的最小有作用剂量（MEL ）与人的可能摄入量比较：＜10 倍应放弃，不允许用于食品＞10 倍进入下一阶段毒理学试验10 倍左右应进行重复试验，或用另一方法验证第二阶段蓄积毒性和致突变试验蓄积毒性试验目的了解受试化学物是否具有蓄积毒性项目蓄积系数法20 d 试验法凡急性毒性实验LD50> 每千克体重10 g 的，可不进行蓄积毒性试验结果判定k ＜3 强蓄积k≥3 弱蓄积1/20 LD50 有死亡，且有剂量-反应关系为强蓄积，放弃1/20 LD50 无死亡为弱蓄积致突变试验目的对受试物的遗传毒性和是否具有潜在的致癌性进行筛选项目细菌诱变试验Ames 试验为首选，其它有枯草杆菌试验、大肠杆菌试验小鼠骨髓微核试验或骨髓细胞染色体畸变分析显性致死试验、小鼠精子畸形试验和睾丸生殖细胞染色体畸变分析任选一项备选遗传毒性试验DNA 修复合成试验果蝇伴性隐性致死试验体外细胞转化试验小鼠淋巴瘤试验程序外DNA 合成试验结果判定3项为阳性无论蓄积毒性如何，表示可能致癌性一般应放弃2 项为阳性强蓄积性应放弃弱蓄积性专家评议，权衡利弊1项为阳性选择2项备选致突变试验2 项为阳性无论蓄积性如何应放弃1 项为阳性强蓄积性应放弃弱蓄积性进入第三阶段3 项均为阴性无论蓄积性如何进入第三阶段短期喂养试验（30d 喂养试验）目的进一步了解毒性作用初步估计无作用剂量(NOEL) 结果判定未发现明显毒性作用，综合其他试验作出初步评价有明显毒性作用，且有剂量-反应关系，应作进一步的毒性试验第三阶段亚慢性毒性试验和代谢试验目的观察较长时间以不同剂量水平喂养后的毒性作用性质和靶器官初步确定无作用剂量(NOEL) 了解受试物对动物繁殖及对子代的致畸作用为慢性毒性和致癌试验的剂量选择提供依据为评价受试物能否用于食品提供依据亚慢性毒性试验项目90 d 亚慢性毒性试验喂养致畸试验同批动物喂养繁殖试验传统致畸试验代谢试验（毒物动力学试验）结果判定以上述试验中任何一项最敏感指标的NOEL 与为人的可能摄入量比较：NOEL≤100 倍表示毒性较强应放弃100 倍＜NOEL ＜300 倍进行慢性毒性试验NOEL≥300 倍进行安全性评价传统致畸试验目的了解受试物对胎仔是否具有致畸作用结果判定根据最敏感指标的NOEL 评价代谢试验目的了解受试物在体内的吸收、分布和排泄的速度及蓄积性了解有无毒性代谢产物形成寻找可能的靶器官为选择慢性毒性试验的动物种系提供依据第四阶段慢性毒性试验和致癌试验目的了解长期接触受试物后的毒性作用性质、靶器官和中毒机制，尤其是进行性或不可逆的毒性作用。了解是否有致癌作用。确定最大无作用剂量，为制定每日容许摄入量(ADI: Acceptable Daily Intake), 最终评价受试物能否用于食品提供依据。实际工作中，将两年慢性毒性试验和致癌试验结合在一个动物试验中进行用两种性别的大鼠和小鼠结果判定根据慢性毒性试验的NOEL 与人的可能摄入量比较是：NOEL≤50 倍毒性较强应放弃50 倍＜NOEL ＜100 倍专家评仪NOEL≥100 倍考虑允许用于食品，制定ADI 任何一个剂量有致癌作用，且有剂量-反应关系，由专家共同评议。二、兽药安全性毒理学评价程序新兽药一般毒性试验技术规范急性毒性试验经口或注射给药的急性毒性试验结果评定以大鼠一次经口LD50 (mg/kg) 为标准：LD50 ＜1 极毒1~50  剧毒50~500  中等毒50~5000  低毒＞5000  实际无毒经皮给药的急性毒性试验结果评定以兔涂皮LD50 (mg/kg) 为标准：LD50 ＜5  极毒5~44 剧毒44~350  中等毒350~2180  低毒＞2180  实际无毒亚慢性毒性试验动物大鼠（100~200g ）或小鼠（15~20g) 试验周期根据临床或生产实际用药时间确定用药时间（d）试验周期（d）1~3  14 14 28 30 90 ＞30 180 结果处理数据汇总成表，用方差分析或X2 统计处理，P ＜0.05 并具有剂量-反应关系，毒性较强病理变化摄成照片，与对照组比较根据中毒症状及停药后组织和功能损害的发展及恢复情况，写出评价报告新兽药特殊毒性试验技术规范Ames 试验必做体外哺乳动物培养细胞（CHO 、CHL) 致突变染色体畸变试验选做特微核试验必做殊体内精子畸形试验任选毒小鼠睾丸精原细胞染色体畸变试验一项性显性致死试验上2项阳性时必做传统致畸试验一般兽药必做致畸喂养繁殖试验饲料药物添加剂喂养致畸试验必须增做我国代表性的安全性评价程序《食品安全性毒理学评价程序》《农药毒性试验方法暂行规定》《化妆品安全性毒理学评价程序和方法》《中华人民共和国药品管理法》《化学危险品安全管理条例》安全性毒性学评价原则我国创新的物质1~4 阶段试验已知物质化学结构基本相同的衍生物或类似物，根据1~3 阶段结果判断是否进行第4阶段试验已知化学物质，WHO 已公布ADI ，且产品质量规格与国外产品一致，先进行1~2 阶段试验，结果与国外一致，不作进一步试验；结果不一致，则进行第3阶段试验安全性评价中应注意的问题实验设计的科学性试验方法标准化良好实验室规范(GLP) 标准操作程序(SOP) 熟悉毒理学试验方法的特点评价结论的高度综合性本章的目的要求进一步了解安全性的概念及安全性评价程序概况。熟悉安全性毒理学评价程序的基本内容。掌握食品安全性毒理学评价程序，包括试验阶段、试验项目和评价。重点和难点食品安全性毒理学评价程序。安全性毒理学评价程序中各阶段的试验项目及其评价。思考题简述食品安全性毒理学评价程序的内容。兽药安全性毒理学评价中应注意什么问题。华中农业大学国家兽药残留基准实验室华中农业大学国家兽药残留基准实验室* * 毒理学实验的数据社会效益经济效益对环境质量和自然资源的影响