3 2 常见风湿病实验检查风湿病病因学检查. RA HLA-DRB10405 0409 风险高达58.2%. SLE HLA-DQB1(nRNP), DQa(SSA/SSB), DQW6(Sm) DQB1(TCR). AS HLA-B27. BS HLA-B51. PM\DM HLA-B8,DR3,DR1. HLA-DRB1 ，ancestral haplotype 祖单倍体8.1 。TNF- -308A SSC HLA-DR1,DR5,DRQI ；P1A2/FN 等位基因与肺纤维化，Scl-70 的阳性呈正相关。SS HLA-DR3. DRBI0602 ，03 （与肾小管酸中毒及SSB 密切相关，DQAI0504 ，DQBI0202 。RF HLA-DR4. OA HLA-A1,B8. HLA 研究进展HLA 抗原基因的多态性，决定了其所表达的HLA 抗原分子的多态性，也决定了HLA 系统免疫应答的多样性与复杂性。近年来HLA 基因分型迅猛发展，使得HLA 基因分型更加准确，简便和实用。HLA 基因分型目前大致分为：限制性片段长度多态性方法PCR- RFLP (restriction fragment length polymophism) 。PCR- SSOP 是以核酸杂交为基础的分型技术。PCR 扩增特定的基因片段，与(sequence specific oligonucleotide probes) 序列特异性寡核苷酸探针杂交，进行分析鉴定。基因芯片或微阵列技术(gene chip or DNA microarray) ：该技术其原理类似于反向斑点杂交。它是指大规模集成电路控制的机器人在尼龙膜或硅片等固相支持物的表面有规律地合成代表不同基因的寡核苷酸探针，或液相合成探针后，通过点样仪点样于固相支持物的表面。这些探针与放射性标记物或荧光素标记的样品的DNA 或cDNA 互补核酸序列相结合，通过放射自显影或荧光检测，对杂交结果进行计算机软件处理分析，获得杂交信号的强度及分布模式图，反映样品中基因表达的情况。PCR-SSCP(single-strand conformation polymorphism) 可检测DNA 片段中不同位置的点突变，而不必象PCR- RFLP 那样，必须选择合适的限制酶，使其识别的位点正好位于等位基因的特异性核苷酸序列处。PCR- SSP(SEQUENCE SPECIFIC PRIMES) 是近年唯一针对急诊和尸体器官移植而设计的。其原理是通过序列特异性引物SSP ，特异的扩增目的DNA 片段，再通过凝胶电泳等手段，判断被扩增序列的存在。作为第3代遗传标记SNP 单核苷酸多态位点(single nucleotide polymorphism) 。已有MHC-SNP 分型试剂盒面市。分子的超型及抗原结合肽超基序的发现，表明可从功能上对类分子进行分类使得该技术更为合理，简明和实用，对于疾病相关性的研究和异体移植有重大意义。AS 的相关遗传因素1：HLA 是一必需的致病基因，但其遗传风险为16~50% 。其亚型有23 个之多，从B2701~2723 。与AS 相关的是2705 ﹑2704 ﹑2701 等等。2 ：CYP2D6 ﹑LMP7 和TNF308 等TNF- 的等位基因；bosak 报道HLA-2 ﹑Bw4 ﹑Cw1/2 ﹑DR1 基因频率均高于健康人群。这提示HLA-A ﹑B﹑C﹑DR 和DQ 区域有与AS 发病的易感基因存在；HLA-B60 增加了AS 依赖HLA-B27 发病的易感性。链球菌感染的检测1 咽拭子培养20~25% SZ( 链球菌酶)检2ASO>500 50% 3DNA 酶-B>210 85% 4ASK( 抗链球菌激酶)>8 5AH( 抗透明质酸酶)>128 6ANDS( 抗核苷酸)<275 抗EBV 抗体RA PHS-2( 福氏志贺菌) Reiter's 肺炎克雷伯菌AS 沙门菌,螺杆菌ReA 炎性实验室指标主要针对疾病活动性ESR: CRP:2 周内>80%, 大于4周<25% OTHER:1. 白细胞及中性粒细胞. 2. 糖蛋白及粘蛋白等. CRP CRP 与炎症CRP 是重要的炎性因子,其致炎作用包括:激活补体、刺激细胞因子分泌、上调内皮细胞黏附分子表达、抑制一氧化氮合成、增加纤溶酶原激活物抑制剂-1 的水平与活性、增强巨噬细胞对低密度脂蛋白的摄取及单核细胞化学趋化性、上调血管紧张素Ⅱ-1 型受体的表达等. CRP 与肥胖关系密切,而且脂肪细胞也可分泌CRP. CRP 水平随年龄的增高而升高,女性较高,吸烟、感染和某些药物可使其增高;而饮酒和某些药物可使其降低. 生化检查1.Ca, P,Fe 等电解质. 2.UA, 磷酸钙双水化合物CPP 等. 3. 肝, 肾,血常规等功能检查. 4.CPK,LDH 同功酶，肌球蛋白，肌凝蛋白重链，肌钙蛋白I（TnI ），等肌酶谱检查. 5. 蛋白及蛋白电泳检查. 6. 雌激素,泌乳素等激素检查. 7. 维生素,骨钙素,TRAP,Pyd,Dpyd 等. 雌激素和催乳素PRL 大家都知道神经-内分泌-免疫调节网络功能失调，会影响的发生和发展。PRL （prolatin ）已被证明具有免疫调节作用，对细胞和体液免疫都有促进作用，而且免疫细胞也能产生PRL 样物质，发挥自分泌和旁分泌作用。大量研究表明在SLE 中PRL 与可的松CS 比值增高反与病情进展相关。男性患者PRL 水平升高而雄激素功能低下，认为PRL 可抑制睾酮的生成，在病因中起作用。但也有人认为不是通过其抑制雄激素而起作用。另外用bromocriptine BRC 溴隐停使PRL 降低可使SLE 病情改善。在RA 已证明PRL 是AA （adjuvant arthritis ）形成的必要条件。国外报道在RA 中PRL 水平上升发生率为10.8% 。SS ，PA ，Reiter 等风湿病都有PRL 水平升高。目前认为1. 可能与可诱导核细胞产生IgM ，IgA ，IgG ，ds-DNA 和ANA 及IgM 类RF ，ANA 滴度增加并且PRL 水平与ANA 相平行。IgG 类ds-DNA 与抗甲状腺微粒体抗体TMA 合成增加，同时伴ESR 增快，淋巴细胞减少。2.PRL 基因在第6号染色体短臂上，与HLA 基因复合体非常近。生殖危险因子与RA 病因相互作用可能是其原因。SLE 女性患者HLA-DRB10301 和PRL 基因之间的连锁不平衡也是原因之一。3. 降低甾类物产生的允许作用。PRL 水平升高在甾类激素分泌减少的情况下起重要作用。一方面糖皮质激素能拮抗PRL 的刺激作用，而性激素对免疫的调节作用随性别而异。另一方面PRL 可影响甾类激素的产生，也可拮抗糖皮质激素的抑制作用。4.PRL 与细胞因子PRL 和IL-2 在免疫方面起协同作用，从而促进AID 的发生。同时PRL 也可促进滑膜纤维母细胞的增殖，并促进IL-6 ，IL-8 的生成。而雌激素和雌激素受体在免疫调节和对许多风湿病发病机制，自身抗体的产生，及对其病理进程的影响巨大。早已为众人所熟悉。滑液正常值PH 7.3-7.43 7.38 WBC(/L) (13~180) 63 N 0-15 7 L 0-78 24 单核细胞0-71 48 滑膜细胞0-12 4 蛋白质(g/L) 12-30 18 P(%) 56-63 60 A(%) 37-44 40 透明质酸盐(g/L) 3 滑液分析外观WBC PC 粘蛋白滑液与血清微生物试验Glu 差异(ml/ml) 晶体等正常清晰，灰黄0~200 <10% 良好无差异_ I 类( 非炎性积液)清晰，稍浊50~4000 <30% 良好无差异_ II 类(非感染偶有LE 细胞轻度炎性) 清晰，稍浊0~9000 <20% 良好无差异补体减少III 类(非感染重度炎性) 混浊100~160,000 70% 不良10 ~30 补体减少晶体等IV 类(感染炎性) 感染高度混浊150~250,000 90% 不良90 细菌培养阳性结核混浊2500~100,000 60% 不良70 结核培养阳性滑液表现I II III IV OA RA 细菌性创伤肢端肥大症AS 结核性骨折骨坏死PA 淋球菌血友病Paget 病SS 神经病性患节炎SLE PM/DM NPA BD SSC WG Wilson RF 淀粉样变REA 结节性红斑IBD 软骨病白血病激素治疗一部分细菌性分子生物技术1. 目的DNA 的来源从组织或细胞中提取. 通过载体获得DNA 片段. 以为mRNA 模板利用逆转录酶合成互补DNA(cDNA). DNA 合成:通过ligation,PCR,probe 来完成. 2. 重组DNA 技术:分子构建,细胞转移,宿主细胞鉴定. 3. 核酸测定和应用DNA/RNA 印迹,PCR, 原位/斑点杂交. DNA 序列测定. ANAs ANA 是指抗细胞内DNA,RNA,AHA,no-AHA,phospholipid……蛋白质分子及其复合物成分的抗体.Miescher 于1957 年发现。1957 年Ceppelini 发现DNA :ssDNA,dsDNA. AHA:H1,H2A,H2B,H3,H4. ENA:Sm,Nrnp,rRNP,SSA/SSB,ScL-70,Jo-1,PM-1,PCNA,RA33,centromere….. DNA 研究DNA 大分子可以存在于循环中或黏附于多种器官的微血管结构，这些循环或器官原位抗原型DNA 均可以与循环抗dsDNA 自体抗体发生反应，形成抗原抗体免疫复合物，激活炎症系统，如补体途径。在器官引起免疫复合物介导的疾病，引起关节炎，血管炎，肾炎等临床表现。dsDNA 抗体水平于疾病活动性，特别与LN 有密切关系。也可作为临床复发的指标。SLE 中的抗DNA 抗体是异基因的。血清的抗体和单克隆抗DNA 抗体可识别不同分子的核酸表位，如磷脂，蛋白，多糖和细胞结构。这说明DNA 本身不可能做为免疫原来诱导DNA 抗体产生。同时这种抗体的多反应性可能与个体Ig 的不同区域的多结合位点或不同抗原的相同表位有关。抗DNA 抗体的产生与NO 有关，活性氧可在细胞分裂中期导致淋巴细胞染色体损害和断裂，使淋巴细胞功能失常或凋亡，释放大量核抗原产生自身抗体。NO 在SLE 中参与产生自身抗体，NO 抑制粒细胞活性，诱导其凋亡，抑制吞噬细胞释放促炎介质，抑制T细胞增殖和IL-2 释放，阻止T辅助细胞分化Th1 细胞，导致细胞免疫功能低下，大量自身抗体产生。在凋亡期间完整的核抗原的大量释放可以提供细胞外足够的核抗原来促进免疫反应，诱导抗体的产生。DNA 免疫哺乳动物具有免疫学特性温和，结构简单的特点，单纯的DNA 分子不能有效诱导免疫反应，抗哺乳动物的DNA 抗体产生与抗原的交叉反应或多克隆B细胞的活化有关。而细菌DNA 由于免疫原性强，结构复杂，能有效地诱导机体对宿主自体细胞以外的DNA 序列区域直接产生免疫应答。SLE 病人抗DNA 抗体主要是Ig1 和Ig3 而且需要T细胞参与，且与所有DNA 的保守序列结合。这与健康人的抗DNA 抗体（Ig2 ）不同. 通过基因重组技术，将编码有特定蛋白抗原的裸露的质粒DNA 注入体内，表达出抗原蛋白，诱导其抗体的表达及T细胞依赖的细胞裂解等一系列特异性免疫应答。DNA 免疫不仅可以诱导体液免疫还可诱生特异性的以CTL 为代表的细胞免疫应答。OTHER ANTIBODY RA: Sa99%, AKA （抗角质蛋白抗体）95%-100%, APF （抗核周因子）40%-50%, AFA （抗聚角蛋白微丝蛋白抗体）为的共同抗原决定族。RF(IgG,IgM,IgA)80%, RA3389.8%. CCP （抗环瓜氨酸肽抗体）46.6% （96.6% ），其中IgG 型为53% ，IgM 型为58% 。A-p68A （为糖蛋白成分GRP ，也称免疫球蛋白结合蛋白Bip binding protein ；实际上是一种内质网分子伴侣。）67.8%;91.3 。常见于RF 阴性患者并出现于RA 早期。SLE: ds-DNA40-90%, AHA3080% , Sm35% , Nrnp20-35% , SSA25-40%, SSB10-15%, hsp40-50%, APL20-50%.anti-neuronal antibodies ，anti-N （血清中62.0% 。脑脊液中47.4% ）抗细胞膜DNA 自身抗体（autoantibidies to membrane associated DNA ，抗mDNA 。）90.0% （98.8% ）；AuA （以Ds-DNA 和AHA 为靶抗原）；抗端粒抗体（抗原为真核细胞末端DNA 中高度重复的TTAGGG/CCCTAA 序列）60% （91%