* * 碳谱注意点：1. 碳信号数目比实际的少，原因可能为信号重叠，或有些季碳信号弱，或隐藏在溶剂信号内；2. 碳信号数目比实际的多，原因可能是某些化合物存在构象异构。分子式：C44H69NO12.H2O 结构式为C44H69NO12 ，在其13C 全去偶谱中应显示44 个峰，但实际显示多达83 个峰，这是因为在溶剂中有两种构像, 一种为优势一种为劣势，（文献报道在氯仿中比例为3:1 ）6. 质谱(MS) ①基本原理：将气体分子经电子流轰击, 使分子中的电子成为带正电荷的分子离子, 而后裂解成一系列的碎片离子, 再通过磁场使不同质荷比的正离子分离并记录其相对强度, 画出质谱图。②主要应用：提供分子离子峰、碎片峰、丰度等信息，可以确定分子量、分子式以及推测部分结构单元。对含有同位素元素( 如Cl 、Br 等) 的药物, 利用同位素簇的丰度比，可推断药物中部分元素的种类、数量，乃至分子式、裂解方式等。③技术要求: a. 应尽量设法获得化合物分子离子峰。当用EI 法不能出现分子离子峰时，可试用其它电离源，如CI ，FAB ，FI ，FD ，ESI 等。b. 所获数据按规定列表，并对重要的碎片离子峰的产生进行解释，提供离子裂解图。c. 高分辨质谱不能反映药品的纯度和结晶水，结晶溶剂，残留溶剂的情况。④资料撰写格式仪器测试条件数据表裂解图解析M/ Z 相对丰度碎片离子7. 热分析①基本原理：采用程序控温下，精确记录待测物质理化性质与温度的关系，研究其受热过程中晶型转变、熔融、升华等物理变化和脱水、热分解、氧化、还原等化学变化。②主要应用：差示扫描量热法（DSC): 测定熔点、结晶水/ 结晶溶剂、考察晶型等。热重法（TGA): 测定结晶水、吸附水和结晶溶剂、分解温度等。③技术要求：a. 应说明使用仪器型号、参数设定值，包括升温度速度、样品重量、温度范围。b. 供试品与对照品应在同一仪器、相同条件下测定。c. 差热分析曲线表达：纵坐标为热流率（dp/dt ），横坐标为温度（℃）。气体一般为氮气，流速为40ml/min 。热重分析曲线表达：纵坐标为重量（mg ）或重量百分数，横坐标为温度（℃），气体一般为氮气，流速为40ml/min 。④资料撰写格式仪器测试条件测试结果和讨论8.X －射线衍射粉末X- 射线衍射主要应用: a. 固体状态下单一化合物的鉴别b. 晶型确定c. 晶态与非晶态物质的判断等单晶X －射线衍射①主要应用: a. 化合物的骨架结构信息b. 化合物的相对或绝对构型c. 构象及差向异构d. 盐键及配位键f. 结晶水/ 溶剂②资料撰写格式仪器测试条件结构解析晶体学参数结构测定方法结构数据结构图结论9. 综合解析在结构确证申报资料中存在的问题主要体现在解析不充分, 未对各项研究提供的数据和信息进行有机、深入、合理地综合分析, 仅是机械式地罗列测试数据和图谱, 没有综合解析过程, 割裂了各种测试数据的联系, 以致未达到对药物结构进行准确认识的目的, 特别是在药物结构中的某些信息需多种方法相互结合才能作出准确判断或多种方法相互结合方可进一步深入了解药物结构信息的情况下, 该现象表现得尤为明显。①综合解析的一般过程: a. 确定化合物的分子式元素分析质谱法（尤其是高分辨质谱）综合各种谱图提供的碳、氢等原子数b. 根据分子式计算不饱和度c. 确定分子中存在的主要官能团和结构单元d. 明确各官能团、结构单元的连接方式e. 对构型、晶型、结晶水/ 结晶溶剂进行分析②技术要求：a. 有对照品样品和对照品的测试结果是否一致波谱信号的归属b. 无对照品详细的解析、正确的归属参考文献可以作为重要的参考资料③资料撰写要求：简明扼要有机合理深入药物的结构确证研究是药物研发的基础, 不论是新药还是仿制药, 都必需先明确其结构。由于原料药的结构确证存在很多特殊情况和不断出现更为先进的分析方法, 在实际工作中, 应根据药物本身的特点, 选择合适的结构确证方法或手段, 科学、合理地将药物的结构进行严密地阐述, 而不能机械地照搬照抄指导原则的方法。申报资料的格式和内容一. 新药的化学结构式、分子式及分子量二. 供确认化学结构用供试品的纯度及检查纯度的方法三. 确证化学结构的方法理化常数元素分析四. 各项波谱和测试的技术要求紫外吸收光谱红外吸收光谱核磁共振氢谱核磁共振碳谱质谱差热分析X- 射线衍射谱综合解析五. 参考文献一. 新药的化学结构式、分子式及分子量二. 供确认化学结构用供试品的纯度及检查纯度的方法三. 确证化学结构的方法2 元素分析①主要应用：确定元素组成、分子式; 除氧元素外，其余各种元素一般均能准确测定其含量。可以反映结晶水/ 结晶溶剂、成盐化合物的酸根和碱基等。C 、H 、N 元素可采用自动元素分析仪测定，其他元素可采用适宜的物理或化学方法测定。　②技术要求：a. 应详细说明使用仪器、测定方法及条件。特别是对测试样品的预处理方法、条件。b. 同一样品测定两次，两次实验数据同时列出，不取平均值。c. 应给出计算理论值所依据的分子式，包括结晶水（或结晶溶剂) 。列表比较实测值与理论值（一般要求误差不超过0.3 ％），初步判定供试品与目标化合物的分子组成是否一致。d. 附测试报告单的复印件。仪器型号与测定条件仪器：Carlo-Erba 1106 元素分析仪( 意大利) 测定条件：1050℃催化燃烧载气：N2 氧瓶法测定测定结果与解析测定结果：样品测定结果与对照品测定结果见附表1 。结果解析：样品与对照品的实测值同理论计算值基本相符，C 、H 、N 、的误差均在千分之五以内，同含5 个结晶水的盐酸大观霉素分子式C14H24ClN2O7 2HCl 5H2O 符合。表1 样品（020708 ）与对照品（DJS ）的元素分析数据 C H N 样品（020708 ）(%) 33.66 7.28 5.64 33.76 7.37 5.67 对照品（DJS ）(%) 33.65 7.30 5.67 33.62 7.29 5.68 理论计算值(%) 33.95 7.33 5.66 ( 四) 各项波谱和测试的技术要求1. 红外吸收光谱(IR) ①基本原理：分子中化学键振动能级的跃迁。②主要应用：a. 鉴定化合物的结构——有对照品、标准图谱b. 推测化合物的结构——确定特征官能团、区分晶型等③技术要求：a. 按药典规定方法校正和检定仪器；b. 正确选择测试方法和条件固体样品首选溴化钾压片法；离子交换----- 氯化钾压片；晶型变化----- 糊法；c. 准确、合理、充分的图谱解析; d. 按要求格式列表和撰写资料; 仪器型号与测试仪器：Nicolet Impact-400 型红外分光光度计仪器测试：用聚苯乙烯膜仪器的测定条件测定条件：样品测定用溴化钾压片法测定图谱：图1 、2 　附图3 ：聚苯乙烯膜红外吸收光谱。④资料撰写格式仪器测试条件仪器校正和检定数据表解析吸收峰(cm-1) 强度振动类型基团2. 紫外吸收光谱(UV) ①基本原理：电子跃迁②主要应用：推测共轭体系的骨架结构（发色团、助色团）紫外光谱——定性吸收系数——定量③技术要求a. 按药典规定方法校正和检定仪器；b. 通常要求三种溶剂：中性、0.1N HCl 、0.1N NaOH ；c. 要求定量，准确计算摩尔吸收系数；d. 归属主要吸收谱带；e. 数据列表说明；④资料撰写格式仪器测试条件仪器校正和检定数据表解析溶剂λmax ε值基团和吸收带溶剂λmax nm Abs 水194.80 200.00 210,00 2.0623 2.2806 0.8209 0.1mol/L 盐酸200.00 204.00 210.00 2.0589 2.2625 1.2121 三乙胺198.00 203.00 210.00 2.0095 2.2711 1.3316 3. 核磁共振氢谱(1H-NMR) ①基本原理：利用原子核的核自旋现象，通过一定振动频率的电磁波照射时，原子核吸收电磁波从低能态向高能态跃迁，即核磁共振。②主要应用可提供供试品中氢原子数目、周围化学环境、相互间关系、空间排列等信息。③技术要求a. 应使用200MHz 以上高分辨NMR 仪。b. 对各项测试条件应有明确、详尽的说明，如仪器型号、规格、溶剂、内标。c. 对分子中全部H 原子均要有明确的解析和归属。d. 对复杂结构化合物，应考虑采用合适的其它技术加以佐证。④资料撰写格式仪器溶剂、内标给出原子编号的分子结构式数据表( 如有对照品或文献数据可以对比列入表中) 解析原子序号化学位移质子数多重性J 值相应质子4. 核磁共振碳谱(13C-NMR) ①基本原理：利用原子核的核自旋现象，通过一定振动频率的电磁波照射时，原子核吸收电磁波从低能态向高能态跃迁，即核磁共振。②主要应用: 可提供供试品中碳原子的数目、所处的不同化学环境信息。③技术要求a. 对各项测试条件应有明确、详尽的说明，如仪器型号、规格、溶剂、内标。b. 在图谱复杂时，应使用质子噪声去偶或偏共振去偶技术，使图谱简化。c. 对分子中全部C 原子均要有明确的解析和归属。d. 对复杂结构化合物，可与类似结构化合物的化学位移进行计算比较，确定合理结构。④资料撰写格式仪器溶剂给出碳原子编号的分子结构式数据表( 如有对照品或文献数据可以对比列入表中) 解析碳原子序号化学位移碳原子类型5. 其他核磁共振谱DEPT 谱: 可区分碳原子的类型; 1H －1Hcosy: 可以显示相隔2 ～3 键相互之间存在偶合的质子对信息; C- Hcosy (HMQC , 异核多量子相关谱): 可以了解分子中C-H 联结情况; HSQC ( 异核单量子相关谱): 用于测定1H-13C 相关信息，可以直接明确C 、H 之间的连接关系; HMBC ( 异核多重键相关谱): 可以显示1H 、13C 之间远程偶合的信息，即相隔二键和三键的1H 、13C 之间相关信号; 解析化合物中存在的结构单元，推测化合物中各官能团、结构单元之间的连接关系; 19F 、31P 等: 可提供相应元素的种类及数目、在分子中所处的化学环境等信息; 常用的二维核磁共振测试包括H-Hcosy （H-H Correlated spectroscopy ）、HMBC （1H-detected multiple-bond heteronuclear multiple-quantum coherence ）、HMQC （1H-detected heteronuclear multiple-quantum coherence ）等，对于结构复杂或用一般NMR 方法难以进行结构确证的化合物，进行二维谱测试可更有效地确证药物的结构。①未在国内外上市销售的原料药按全新化学单体要求：推论结构a. 完成必要的各项测试; b. 应提供充分的试验图谱和数据; c. 按新化合物要求进行图谱解析和综合解析; 如有参考文献资料，可提供作参考。②已在国外上市销售但尚未在国内销售的原料药或已有国家标准的原料药按已知化学结构的药物：验证结构可以使用对照品可以参考文献a. 有合格对照品的化合物：提供测试样品和对照品在完全相同条件和同一仪器上测得的各项图谱和数据，完成所需的各项目测试，若二者完全相同，并对重要的波谱讯号和测试数据进行了正确解析，即可得出二者化学