易栓症的实验室诊断 西安交通大学医学院马西诱发静脉血栓形成的环境因素疾病:手术(整形术)、创伤、急性感染、肿瘤、败血症、高血压、风湿、肾病综合征、充血性心里衰竭、代谢疾病(糖尿病和脂质代谢障碍)、静脉曲张、静脉炎等。药物:化疗药物(天冬酰氨酶)、口服避孕药、雌激素、黄体酮。自然状态:老龄、妊娠、长期卧床、肥胖。检查对象1. 有VTE 病史者:DVT 、肺栓塞、肠系膜血栓或脑血栓(少见)。首次发病年龄<45 岁更是潜在检查对象(占大约9% )。2. 复发性血栓栓塞症:占易栓症的约50% 。3. VTE 先证者的亲属:至少包括第一代。4. 有习惯性流产病史者:包括患者和其亲属。5. 术前筛查:局限在有VTE 病史或有家族史的病例。检查项目 首选抗凝血因子系列(包括抗凝血酶、蛋白C、蛋白S)、活化蛋白C抵抗性、因子V Leiden 突变和凝血酶原G20210A 突变、狼疮抗凝物和抗磷脂抗体。其次同型半胱氨酸、因子VIII 水平等。检查时机一般在血栓发作急性期和抗凝治疗(抗血栓治疗)期间不宜做化验检查,要等到病情稳定后6个月或者停止药物治疗后3周才可进行检查。试验方法以凝固法为基础I 功能性测定速率法发色底物法终点发II 抗原测定:免疫电泳法III DNA 分析:确定基因缺陷IV 抗体检查:ELISA 遗传性PC 缺陷症的实验室分型 类型凝固法发色底物法抗原含量I ↓↓↓IIa ↓正常正常IIb ↓↓正常遗传性PS 缺陷症的实验室分型类型总PS 游离型PS 活性水平I ↓↓↓II 正常正常↓III 正常↓↓APC 抵抗性试验APC 抵抗性试验是以APTT 为基础,通过在被检血浆中添加APC 来判断是否存在APC 抵抗。以因子V缺乏血浆稀释被检血浆,再比较添加APC 前后APTT 结果,可大大提高检测的特异性。有抗APC 现象而无因子V Leiden 突变,又称作获得性抗APC 症,常伴随因子水平或凝血酶原水平升高。获得性抗APC 现象也是静脉血栓的危险因素。有时,口服避孕药,某些妊娠和存在LA 也会引起抗APC 现象。狼疮抗凝物检查筛选试验:APTT* 或dRVVT 延长。鉴别试验:被检血浆与正常血浆等量混合,重复APTT 测试。如果延长的APTT 可被加入的正常血浆纠正,则认为是凝血因子缺陷,否则认为是存在LA 。* 由于因子抗体引起的APTT 延长也可被加入的正常血浆纠正。偶然会出现加入正常血浆后APTT 反而延长的现象,称之为狼疮辅因子效应(lupus cofactor effect )。* 若在dRVVT 试剂中掺入血小板磷脂,可提高试验的特异性。如果延长的dRVVT 可被加入的血小板磷脂纠正(无论是部分纠正或完全纠正),可以表明LA 的存在。存在LA 时被检血浆凝固时间与正常血浆凝固时间的比率>1.2 ,纠正试验的比率<1.2 。固相抗磷脂抗体检查aCL 抗体:aCL 抗体大致分为3个类型,包括IgM ,IgG 和IgA 。aCL 抗体在临床的检出率依次为:IgM>IgG 型>IgA 型。IgM 型与血栓相关性最好,而IgA 型与血栓并发症关系不明确。aCL 抗体是有血栓病史病人的例行检查项目,即便是在LA 阴性的情况下。β2-GPI 抗体:与血栓栓塞症的相关性要比aCL 抗体试验好,受感染情况下短暂性抗体的影响小。 易栓症的筛选试验:Thrombogram (凝血酶生成曲线)凝血酶的生成与调节凝血酶生成的“浴缸”动力学 Thrombogram (凝血酶生成曲线)测定 HC.Hemker@Thrombin.com 试验原理血浆+ 激活物(rTF 和/或磷脂)凝血酶凝血酶+ Z-Gly-Gly-Arg-AMC* Z-Gly-Gly-Arg+AMC** *S2238 **7- 氨基-4- 甲基双香豆素试验体系组成贫血小板血浆(80 uL )富血小板血浆(80uL) + + rTF 和PL (20uL )rTF (20uL )+ + Flu-Ca (20uL )Flu-Ca (20uL )荧光光度计监测AMC 变化rTF: 30pM ,终浓度5pM PL: 24uM( 丝氨酸磷脂/卵磷脂/磷脂酰乙醇胺),终浓度4uM Thrombogram 在检测高凝状态和凝血障碍的应用 谢谢* 环境因素高度危险遗传因素遗传因素促凝基因异常抗凝基因异常血栓栓塞是遗传因素与环境因素相互作用的结果分类遗传性易栓症:抗凝血酶缺陷、蛋白C / 蛋白S缺陷、因子V Leiden 、凝血酶原G20210A 。获得性易栓症:抗APC 症、高同型半胱氨酸血症、抗磷脂抗体。遗传/获得性与易栓症有潜在关联的危险因素:凝血因子水平升高、异常纤维蛋白原血症、血栓调节蛋白缺陷、肝素辅因子II 缺陷、纤溶酶原缺陷、富组氨酸糖蛋白水平增高、纤溶酶原活化抑制物缺陷。凝血酶原凝血酶FII G20210A 肝素-AT 凝血反应(127 个突变)AT 缺陷FVIII FV FV Leiden (G1691A ,精560 谷)APC PS PS 缺陷(131 个突变)PC PC 缺陷(161 个突变)凝血酶调节蛋白-凝血酶遗传性易栓症的病因几种遗传性易栓症的发病率* VT 病人正常人群FV Leiden 20% 4.8% FII G20210A 6-9% 2-5% PC 缺陷3-4% 0.2-0.4% PS 缺陷2-2% 不详AT 缺陷1-2% 0.02% * 西方人群发病率遗传性AT 缺陷症的实验室分型* 类型抗凝活性肝素结合活性抗原含量免疫电泳I ↓↓↓正常IIRS ↓↓正常正常IIHBS 正常↓正常异常IIPE ↓↓↓异常*RS: 反应中心缺陷;HBS: 肝素结合缺陷;PE: 反应中心与肝素结合同时缺陷。*
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