欧盟和中国对工艺验证要求的差异1 、从验证的分类来看：欧盟对工艺验证执行回顾性验证（收集批号至少20 批）或是同步验证（收集批号至少3 批）没有特别的要求。但部分的欧盟检查官认为，API 最先是在实验室合成成功以后，转入生产的，因此应有前验证，并在试验开发阶段确立关键工艺参数，但当解释到我们多为老产品，检查官对前验证没有更多要求。但要求在实验室条件下，评估关键工艺参数。2 、从验证的内容来看：在工艺验证中，欧盟检查官会关注如下内容：关键工艺参数有哪些关键质量参数有哪些成品的杂质档案如何（有关物质）验证批号及批数选择的原则. 成品中残留溶剂的量是否达到推荐的标准验证时设备和仪器仪表的校验状态是否得到确认验证批号是否有偏差出现，出现的偏差是否进行调查并建立预防措施纯粹的产品工艺验证要覆盖设备、工艺、校验、偏差、成品检验等所有内容3 、欧盟非常关注对变更的验证：欧盟非常关注对变更的验证，特别是对起始物料和关键工艺参数的变更。这一类变更，一定要反映出变更前后杂质档案的变化。变更起始物料和关键工艺参数，一条重要的标准是：物料的杂质档案( 原料的杂质档案, 成品的杂质档案) 没有发生变化，没有新杂质产生。但中国GMP 对货源变更验证往往不很重视。4 、欧盟非常关注对回收工艺的验证对回收物料和回收溶媒进行验证。欧盟对回收物料的验证标准是：通过验证建立回收物料和回收溶媒的回收工艺，制定处理程序。对回收物料要建立适当的质量标准，应对相关杂质进行检测。回收物料不能无限期的循环，以防止杂质的积累，应限定循环次数或革除的条件。5 、欧盟非常关注对对再验证周期的要求在产生变更时，随时进行变更验证；在没有变更的情况，间隔一定的周期（一般是4 年）要定期进行工艺再验证。6 、工艺验证中注意事项确认所有设备、仪器仪表已得到校验合格；确认对验证中所有偏差进行记录，并建立有效的预防措施；确认已建立合适的可接受标准；如可能，应进行挑战性试验；应选取足够的批数, 并说明选取原则. 范围范围指能达到一定精密度、准确度和线性，测试方法适用的高低限浓度或量的区间。分析方法的范围应根据具体分析方法以及对线性、准确度、精密度的结果和要求确定。可接受标准对于原料药和制剂的含量测定，范围应为测试浓度的80%~120% 杂质测定，范围应为测试浓度的50%~120% 。含量均匀度，范围应为测试浓度的70%~130% ，根据某些剂型特点（如气雾剂），此范围可适当放宽。溶出度范围应为标准规定范围的± 20% 。如某一剂型的溶出度规定，1h 后溶出度不得小于20% ，24h 后溶出度不得小于90% ，则考察此剂型的溶出度范围应为0~110% 。若含量测定与杂质检查同时测定，用百分归一化法，则线性范围应为杂质规定限度的-20% 至含量限度的20% 。准确度准确度系指用该方法测定的结果与真实值或参考值接近的程度，一般以回收率% 表示。准确度为定量测定的检测项目均需要验证其准确度，如杂质定量检查、含量和溶出方法，分析方法的准确度能够确保：1 ）样品中的待测物全部溶解；2 ）待测物全部从检测器中检出。准确度的测定至少选取包括标准浓度在内的至少3 个浓度级别（通常选取80% 、100% 和120% ），每个浓度级别至少测定3 次，计算测定结果的回收率。准确度原料药可用已知纯度的对照品或符合要求的原料药进行测定；用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定的结果进行比较；制剂用含已知量被测物的各组分混合物进行测定；如不能得到制剂的全部组分，可向制剂中加入已知量的被测物进行测定；用本法所得结果与已建立准确度的另一方法测定结果进行比较。杂质往样品中加入已知量的杂质进行测定；若不可能得到某种杂质或降解产物，可把此方法的分析结果与另一已验证的或药典的分析方法获得的结果进行比较。准确度回收率测定方法空白回收（制剂空白）＝；加样回收＝其中：Ｍ为测定值；Ｐ为背景值；Ａ为已知值（真实值）。　　同一样品，制备三个浓度的供试品，每个浓度分别制备三份供试液，例如：取相同量样品9 份（一般为样品取样量的一半）。设计三个浓度，按不同比例加入对照品。中间浓度一般按1:1 比例加入；低浓度和高浓度可分别选0.5:1 和1.5:1 的比例，加入对照品的量要适当，保证供试品溶液的浓度在考察的线性范围内可接受标准含量和溶出各浓度下的平均回收率应在98.0%~102.0% 之间，9 个回收率数据的相对标准差（RSD ）应不大于2.0% 。中药一般应满足以下规定：回收率计算值在95%~105% 范围，相对标准偏差(RSD) 簿层扫描法＜5.0% 。准确度杂质杂质水平接受标准≤0.2% 绝对值± 0.05% 0.2%~1.0% 相对值± 20% ＞1.0% 相对值± 10% 精密度重复性重复性系指在同样的操作条件下，在较短时间间隔内，由同一分析人员测定所得结果的接近程度。在方法规定的线性范围之内至少测定9 次（如3 个浓度级别80% ，100% 和120% ，每个浓度级别测定3 次）或在100% 的试验浓度，至少测定6 次。每种测定应从样品称量或者高浓度溶液的稀释开始。精密度中间精密度：系指同一实验室不同日期、不同仪器、不同分析人员对同一样品、采用同一方法处理样品所得结果之间的接近程度。验证方法：同一批样品每位分析员准备六份进行测量，计算两人之间平均值的差异。重现性：一般实验室不进行此项考察，只有当分析方法将被法定标准采用时，才进行重现性试验。建立药典分析方法时常需通过协同检查得出重现性的结果。精密度可接受标准重复性原料药方法验证时，API 的RSD≤1.0% ；制剂方法验证时，活性成份的RSD≤2.0% ；杂质方法验证时，每个杂质的RSD≤20% 。中间精密度原料药方法验证时，平行六份样品的RSD≤1.0% ，两人之间的平均值之差≤1.0% 。制剂方法验证时，平行六份样品的RSD≤2.0% ，两人之间的平均值之差≤3.0% 。杂质方法验证时，平行六份样品的RSD≤20.0% ，两人之间的平均值之差如下：结果限度≤0.2 绝对0.2~1.0 相对＞1.0 相对检测限和定量限检测限系指在确定的试验条件下，试样中被测物能被检测出的最小值，定量限系指在确定的试验条件下，试样中被测物能被准确测定的最小量，其测定结果应具有一定准确度和精密度，杂质限度检查时应验证其方法的检测限，杂质定量检查时应验证其方法的定量限。确定某一分析方法检测限和定量限的方法：目视法（直观评价，非仪器分析）可用于非仪器的分析方法，也可用于仪器的分析方法，用已知浓度的被测物，试验出能够被可靠的检测出的最底浓度或量；对于定量限需要有一定的准确度和精密度。检测限和定量限信噪比该方法适用于出现基线噪音的分析方法。信噪比的测定是通过比较含已知低浓度被分析物的样品与空白样品的测试信号，确定被分析物可被确切地检测的最小浓度，典型的信噪比为3:1 ；对于定量限典型信噪比为10:1 。根据响应值得标准差和斜率检测限：LOD=3.3δ/ S 定量限：LOQ=10δ/ S δ：响应值得标准差；S ：校正曲线斜率。效率S 可从被分析物的校正曲线来估算，δ的值可有多种途径估算。如：根据空白的标准差通过几份空白样品的分析，然后计算其响应值得标准差，测出分析背景响应值得大小根据校正曲线通过被分析物样品的分析来研究其标准曲线，回归线的剩余标准差或回归线的y 轴截距标准差都可作为标准差。耐用性耐用性系指测定条件下发生小的变动时，测定结果不受影响的承受程度。耐用性主要靠考察方法本身对于可变试验因素的抗干扰能力。开始研究分析方法时，就应该考虑其耐用性。如果测试条件要求苛刻，则建议在方法中予以写明。典型的变动因素包括：液相色谱法中流动相的组成、流速、PH 值、不同厂家或不同批号的同类型色谱柱、柱温等。气相色谱法中载气流速、不同厂家或批号的色谱柱、固定相、载体、柱温、进样口和检测器温度等，参数改变标准一般要求如下：耐用性项目考察范围进样体积±20% 流速±20% 波长±5nm 柱温± 流动相组成±5% PH 值±0.2 超声时间±5% 样品根据产品特性制定最长时间耐用性在评估参数时需要获得改变条件后与标准条件下的测量结果，通过对改变条件后与标准条件下结果的比较来评估方法的耐用性，计算公式如下：%Difference=100-100×Rm/Rs 其中：Rm 改变条件后的含量结果；Rs 标准条件获得的含量结果。原料药和制剂主要成分的含量差异不得大于1.5% 。杂质杂质水平接受标准≤0.2% ±0.05% 0.2%~1.0% ±20% ＞1.0% ±10% 谢谢清洁验证主要的5 个内容1. 法规对清洁验证的要求及背景2. 清洁方法的开发设计3. 清洁分析方法的验证4. 清洁验证示例及分析5. 清洁验证审计中经常出现的问题法规对清洁验证的要求新版GMP 的要求第一百五十五条清洁方法应经过验证，证实其清洁的效果，以有效防止污染和交叉污染，清洁验证应综合考虑设备的使用情况、所使用的清洁剂和消毒剂、取样方法和位置以及相应的取样回收率、残留物的性质和限度，残留物检验方法的灵敏度因素。欧盟GMP 的要求36. 为确认清洁规程的效力，应进行清洁验证，应根据所涉及的物料，合理的确认产品的残留、清洁剂和微生物污染的限度标准，这个限度标准应该是可以达到的，能够证实的。37. 应使用经验证的、检出灵敏度高的检验方法来检测污染物，每种分析方法或仪器的检测灵敏度应足以检测出设定合格限度水平的残留或污染物。38. 通常只有接触产品设备表面的清洁规程需要进行验证，应验证设备使用及清洁的间隔时间，以及清洁设备可保留的时间，并通过验证确定清洁的间隔时间和清洁方法。欧盟GMP 的要求39. 对于相似产品和相似工艺而言，可从相似产品及工艺选择一个具有代表性的产品和工艺进行清洁验证，40. 为证明清洁方法的有效性，通常采用连续3 个批次，并且检验合格。41. 清洁验证不应采用不断测试，直至清洁的方法。42. 如果实际产品存在毒性物质或有害物质，在清洁验证中，可以例外的采用物理化学特性相似的无毒无害的物质来模拟。FDA 的要求1. 检测书面的SOP 。其中必须包括各部件的清洗过程2. 必须建立书面的清洗方法验证通则3. 清洗方法验证通则应规定执行验证负责人，批准验证工作的负责人、验证标准、再验证时间。4. 对各生产系统或各设备部件进行清洁验证之前，应制定专一特定的验证计划，其中应规定取样规程、分析方法。5. 按上述验证计划进行验证工作并记录验证结果。6. 做出最终的验证报告，报告应由有关管理人员批准，并说明该清洁方法是