临床免疫检验质量保证卫生部临床检验中心李金明定义质量保证(Quality Assurance,QA) 为一产品或服务满足特定质量要求提供充分可信性所必要的有计划的和系统的措施。室内质量控制（Internal Quality Control,IQC) 由实验室工作人员，采取一定的方法和步骤，连续评价本实验室工作的可靠性程度，旨在监测和控制本实验室工作的精密度，提高本室常规工作中批内、批间样本检验的一致性，以确定测定结果是否可靠、可否发出报告的一项工作。定义室间质量评价（External Quality Assessment, EQA ）为客观比较一实验室的测定结果与靶值的差异，由外单位机构，采取一定的办法，连续、客观地评价实验室的结果，发现误差并校正结果，使各实验室之间的结果具有可比性。这是对实验室操作和实验方法的回顾性评价，而不是用来决定在实时的测定结果的可接受性。当EQA 用来为执业许可或实验室认证的目的而评价实验室操作时，常描述为实验室能力验证（Proficiency testing, PT ）。在以前的文献中，EQA 常描述室间质量控制。定义批(Run) 在相同条件下所获得的一组测定。均值（Mean ）标准差（Standard deviation, SD 或s ) 变异系数（Coefficient of variation, CV ）定义正态分布(Gaussian distribution) 当一质控物用同一方法在不同的时间重复多次测定，当测定数据足够多时，如以横轴表示测定值，纵轴表示在大量测定中相应测定值的个数，则可得到一个两头低，中间高，中为所有测定值的均值，左右对称的“钟形”曲线，亦即正态分布，又称高斯分布。定义正态分布的基本统计学含义可用均数（）、标准差（s）和概率来说明。临床实验室常规检验步骤标本收集：选择测定项目、标本收集和保存。实验室测定：标本接收、贴标签、样本处理、检测、测定的有效性和临床诊疗价值。报告和解释：结果发出、结果解释和临床管理。质量保证、室内质控和室间质评之间的关系实验室质量管理体系的建立质量手册质量体系程序文件标准操作程序( 相关记录表格) 质量管理的内涵写你所做的做你所写的记录你已做的分析你已做的怎样编写SOP ？分析你已做的每次实验结果的分析表象与真象多次实验结果的综合分析趋势的内在含义仪器设备的使用情况分析维护与校准周期的有效性临床免疫检验方法三大“标记”免疫检验技术:荧光标记、放射性核素标记和酶标其它标记免疫测定技术：发光物标记、金标、元素标记等免疫沉淀和免疫凝集试验免疫检验技术的应用(1) 免疫比浊和免疫沉淀:灵敏度低;可用于体内含量较高的Ig 、补体、CRP 等的测定; (2) 标记免疫检验技术:放免酶免灵敏度高;用于含量低的激素、病原体抗原抗体测定等;荧光标记技术有特定的应用;金标则为一种很方便的point of care 检验技术。免疫检验的标本标本采集、运送和保存可能影响测定结果的标本因素标本类型及采集容器最常用的标本：血液，包括血清、血浆和全血。唾液或尿液。建议采用真空采血管及蝶形针具，以免直接接触血液。采集容器最好为一次性无菌密闭容器。标本采集时间及患者准备激素和治疗药物：可的松峰值在早晨4～6点之间；生长激素、促黄体激素（LH ）和促卵泡激素（FSH ）均以阵发性方式释放，须在密切相连的时间间隔内采取数份血样本，以其中间值为测定值。又如当从卧位变为站立位时，血清中肾素活性将出现明显增高。再如治疗药物的检测，应根据药代动力学选择服药后的最适时间抽血检测。标本采集时间及患者准备感染性病原体抗原、抗体肿瘤标志物特定蛋白可能影响测定结果的标本因素内源性干扰因素：类风湿因子、补体、异嗜性抗体、治疗性抗体、自身抗体、溶菌酶、磷脂、药物小分子、总蛋白浓度等外源性干扰因素：溶血、细菌污染、标本贮存时间过长、凝固不全、反复冻融类风湿因子(RF) 干扰RF 一般为IgM 型，亦有IgG 和IgA 型RF 具有与变性IgG 产生非特异结合的特点在捕获法IgM 型特异抗体的测定中表现最为明显，因为此时固相包被的抗体为抗人μ链抗体，IgM 型RF 的存在可使其大量结合于固相。类风湿因子干扰的排除稀释标本改变酶标抗体用变性IgG 预先封闭标本中RF 测抗原,可加入还原剂如2- 巯基乙醇去除RF 使用特异的鸡抗体IgY 作为酶标或固相抗体补体干扰固相抗体和酶标二抗可因为其在固相吸附及结合过程中，抗体分子发生变构，从而其Fc 段的补体C1q 结合位点被暴露出来，这样C1q 就成为一个中介物将二者交联起来，从而出现假阳性结果。固相抗体也会因为活化补体的结合，封闭抗体的抗原表位结合能力，而引起假阴性结果或使定量测定结果偏低。补体干扰的排除56℃30min 加热可使标本中补体C1q 灭活使用特异的鸡抗体IgY 作为酶标或固相抗体异嗜性抗体的干扰天然的异嗜性抗体（IgG ）可分为两类: 一类（85% 的假阳性由其引起）可结合于山羊、小鼠、大鼠、马和牛IgG 的Fab 区域，但不与兔IgG 的Fab 区结合。另一类（15% 的假阳性由其引起）可结合于小鼠、马、牛和兔IgG 的FC 区表位，但不与山羊和大鼠IgG 的FC 区表位结合。异嗜性抗体可通过交联固相和酶标的单抗或多抗而出现假阳性反应。异嗜性抗体干扰的排除使用特异的兔F(ab’)2 片段作为固相或酶标抗体。在标本或标本稀释液中加入过量的动物Ig ，封闭可能存在的异嗜性抗体。但加入量不足或亚类不同时无效。使用靶特异的非Ig 亲和蛋白（Affibody ）替代固相或酶标抗体之一。采用噬菌体展示技术展示来自单个金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA ）联合文库的人IgA 结合亲和蛋白，用于IgA 的测定，不受异嗜性抗体的影响。使用特异的鸡抗体作为固相和测定抗体。抗鼠Ig 抗体的干扰及排除抗鼠抗体对使用鼠源性单克隆抗体的酶免疫测定，可产生假阳性结果干扰排除可采用下述方法: 使用特异的抗体F(ab’)2 片段作为固相或测定酶标抗体。在标本或标本稀释液中加入过量的鼠Ig ，封闭可能存在的抗鼠抗体。使用特异的鸡抗体IgG 作为固相和测定抗体。鸡IgG 不与人抗鼠抗体反应。因而，用其作为固相或酶标抗体不会出现假阳性结果。自身抗体干扰自身抗体如抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等，能与其相应靶抗原结合形成复合物，在ELISA 方法中可干扰相应抗原抗体的测定。为避免以上情况出现，可在测定前用理化方法将其解离溶菌酶干扰溶菌酶可与等电点较低的蛋白有强的结合能力。免疫球蛋白等电点约为5，因此，在双抗体夹心法ELISA 测定中，溶菌酶可在包被的IgG 和酶标的IgG 间形成桥接，从而导致假阳性。为保证ELISA 测定的可靠性，有必要从标本中去除溶菌酶或将其封闭，Cu2+ 离子和卵白蛋白可有效地封闭溶菌酶，防止其联接IgG 。标本溶血注意避免出现严重溶血。血红蛋白中含有血红素基团，其有类似过氧化物的活性，因此，在以HRP 为标记酶的ELISA 测定中，如血清标本中血红蛋白浓度较高，则其就很容易在温育过程中吸附于固相，从而与后面加入的HRP 底物反应显色。标本被细菌污染细菌的生长，其所分泌的一些酶可能会对抗原抗体等蛋白产生分解作用细菌的内源性酶如大肠杆菌的β- 半乳糖苷酶本身会对用相应酶作标记的测定方法产生非特异性干扰。标本贮存时间过长标本在2~8℃下保存时间过长，IgG 可聚合成多聚体，在间接法ELISA 测定中会导致本底过深、甚至造成假阳性。血清标本如是以无菌操作分离，则可以在2～8℃下保存一周，如为有菌操作，则建议冰冻保存。样本的长时间保存，应在－70℃以下。标本凝固不全血液采集后，如收集管中无促凝剂和抗凝剂，则血液通常在半小时后开始凝固，18~24h 完全凝固。日常检验中，常在血液还未开始凝固时即离心分离血清，此时因血液没有完全凝固，离出的“血清”并非为完全的血清，其中仍残留部分纤维蛋白原，如将其加入微孔中，在ELISA 测定过程中仍可以形成肉眼可见的纤维蛋白块，易造成假阳性结果血液标本采集后，应使其充分凝固后再分离血清，或标本采集时用带分离胶的采血管或于采血管中加入适当的促凝剂。冰冻保存标本避免反复冻融反复冻融所产生的机械剪切力将对标本中的蛋白等分子产生破坏作用，从而引起假阴性结果。酶联免疫吸附试验（ELISA ）影响ELISA 测定的因素试剂盒的因素实验操作影响ELISA 试剂盒质量的因素固相材料:聚苯乙烯塑料抗原:纯化、合成和基因工程抗原抗体：多抗、单抗和基因工程抗体酶结合物：酶免疫测定的核心成份色原底物：OPD 和TMB 运输贮存固相上抗原抗体的相互作用固相上抗原抗体结合反应所需要的时间反应体积离解速率微孔内特异抗体的免疫测定固相的抗体或抗原固相上抗原抗体结合反应所需要的时间固相抗原抗体结合达到平衡所需要的时间，要大于液相免疫测定，并随液体所占体积与界面抗体或抗原受体所占体积比的增加而增加。扩散性越强则反应所需时间越短，结合越充分。这一点可通过旋转振荡来达到, 也可在微孔中放一个惰性的塞子以使反应液体成为一个小体积，或使用一个具有大表面的多孔的基质如硝酸纤维素，或使用微颗粒来做到这一点。反应体积此处的反应体积并非是微孔中的液体体积，而是固相免疫测定中与固相包被的抗体或抗原有接触的部分固相抗原抗体反应发生于液体-固相界面，可能处于一级结合键的引力距离内，小于100 。液相中待测抗原或抗体要进入到这个结合界面，需要扩散或质量转移。微颗粒的反应表面区域较微孔要大得多，因而处于抗原抗体结合界面的体积占总反应体积的比例亦高得多。因此，结合反应的效率更高。这也是全自动化免疫测定分析仪均采用微颗粒固相的重要原因之一。离解速率固相界面上结合反应的离解速率较液相中的要低两个梯度被动吸附于固相的抗原和抗体显然也是成簇或聚集状的，因此，反应界面的抗原或抗体可能也是“成簇的”大多数抗原-抗体的离解所需的能量比防止其结合所需的能量要大，表明在初始结合键形成后，又形成了次级结合键。很高的固相抗体或抗原浓度，尤其是以成簇出现的以及来自于限定的界面反应体积的抗体或抗原，使得离解的抗原的重新结合较液相系统更为快速。即使是测定的反复洗涤步骤，也可使抗原抗体仍保持处于结合状态。微孔内特异抗体的免疫测定使用吸附的复杂抗原进行微孔内特异抗体的免疫测定，与液相测定相比，有明显的亲和力依赖性固相抗原的捕获能力差的原因: 1. 有结合能力的抗原浓度极低。这可能是由于所吸附的抗原因为变性或空间位阻而致抗原表位丧失的结果。2. 抗原表位由于吸附发生改变，使得其被其抗体结合部位以较低的亲和力结合。固相的抗体或抗原固相