第13 章生物药物分析概论本章主要内容5. 生化药物和基因工程药物特点1 ）共同特点：活性强，毒副作用小2 ）分子量大，结构确证难3 ）全过程的质量控制：从原料、菌种到生产设备、中间体、产品4 ）生物活性检查5 ）安全性检查：异常毒性检查、过敏物质检查、外源性DNA 残留量、宿主菌蛋白残留量等6 ）效价（含量）测定收录于《中国药典》和《中国生物制品规程》1. 鉴别1）理化鉴别法：UV 、肽图等2）生化鉴别法：免疫法、酶法、电泳法等2. 杂质检查1）一般杂质：氯化物、重金属、水分等2 ）特殊杂质：有关物质等标准蛋白色谱图1. 右旋糖酐蓝2. 醛缩酶3. 血清白蛋白4. 碳酸酐酶5. 抑蛋白酶肽6. 酪氨酸重组人肿瘤坏死因子相关调亡诱导配体（rhTRAIL ）质控方法和质量标准的研究《药物分析杂志》2005 ，25 （3）253-257 Synmetry 300 C18 柱（3.9×150mm ）3. 安全性检查1）热原检查家兔法、鲎试剂法2 ）降压物质检查3 ）过敏试验4 ）异常毒性试验豚鼠、大鼠存活试验5 ）无菌试验6 ）宿主细胞蛋白残留、DNA 残留ELISA 法1）理化分析法：重量法、滴定法、电化学法、光谱法色谱法（HPLC 法）2）生化分析法酶法：免疫分析法3）生物检定法药物对生物体或离体器官所起的生物活性例：冻干基因工程α1b 干扰素制造及检定规程本品系用从健康人白细胞中获得的α1b 干扰素基因重组质粒，传染大肠杆菌，使之高效表达人α1b 干扰素，经高度纯化后冻干制成。用于治疗慢性乙型肝炎、丙型肝炎和毛细胞白血病等疾病。　检查：纯度：1 电泳纯度2 高效液相色谱纯度pH 值水分安全性检查：残余外源性DNA 含量残余IgG 含量残余工程菌蛋白含量抗生素活性无菌试验热原质试验异常毒性中国药科大学药物分析教研室中国药科大学药物分析教研室生物药物种类与特点生物药物质量检验的基本程序与方法生物药物理化测定法：HPLC 法、酶法、电泳法生化药物生物制品（生物技术药物）生物药物（biopharmaceuticals ）：利用生物体、生物组织和器官制得的天然活性物质及其类似物一、概述分类没有严格的界限动植物及微生物提取、分离的天然生物活性物质及半合成得到生命基本物质及其衍生物等生化药物biochemical drugs  人纤维蛋白原凝血酶、胰蛋白酶肝素、玻璃酸氨基酸、Pr 类酶、辅酶类多糖类脂类核酸类应用普通的或以基因工程、细胞工程、蛋白质工程、发酵工程等生物技术获得的微生物、细胞及各种动物和人源的组织和液体等生物材料制备的药品自动免疫制品生物制品biological products  其他（血液制品、组织制品等）免疫血清菌苗、疫苗、类毒素诊断制品利用重组DNA 等生物技术生产的药物基因工程药物biotechnology drugs 发现并确定有治疗作用的Pr 分离或合成控制该Pr 合成的基因将该基因导入受体细胞受体细胞表达该Pr 分离纯化胰脏(A)n 胰岛素原mRNA cDNA 重组质粒转化细菌mRNA 反转录酶胰岛素原基因与质粒连接感染E.coli 胰岛素原重组胰岛素原的合成基因工程药物主要类别蛋白质多肽类：激素类及神经递质类细胞因子类酶及凝血因子类核酸类：反义寡核苷酸等人生长激素释放抑制因子（Human Somatotin ）干扰素（Human Interferons ）链激酶（Streptokinase ）二、检验的程序和方法鉴别杂质检查安全性检查含量（效价）测定反应序列信息RP-HPLC 法分析重组人胰高血糖素类多肽－1（7－36 ）肽图谱《药物分析杂志》2005 ，25(1)24-26 标准品样品胰蛋白酶酶解V8 蛋白酶酶解rhGLP-1(7-36) 由30 个氨基酸组成，结构中含2Lys 、1Arg 、1Asp 、3Glu 3）生物鉴别法：动物试验等专属性强，应用广泛免疫双扩散法SDS-PAGE Marker Sample 116.0k 66.2k 45.0k 35.0k 25.0k 18.4k 14.4k 高效凝胶过滤色谱法(High Performance Gel Filter ，HPGFC ）、RP-HPLC 萄聚糖凝胶立体网状结构图时间(min) 0 4 8 12 1 6 5 4 3 2 4. 含量（效价）测定例：蛋白质含量测定（ChP2005 三部）凯氏定氮法Lowry 法双缩脲法酶活力测定法以酶为分析对象进行分析酶分析法以酶为分析工具或分析试剂的分析方法测定效价时采用参考品，体内、体外方法测定活性，计算效价IU 同时测定蛋白含量，计算特异比（比活性，IU/mg ）主要包括以下内容：1 菌种2 发酵3 收菌4 菌体裂解与粗制干扰素制备5 浓缩与纯化6 稀释、除菌过滤7 半成品检定8 除菌半成品检定9 成品检定10 规格11 保存与效期12 冻干基因工程α1b 干扰素使用说明书鉴别：分子量测定肽图测定等电聚集紫外光谱扫描外观半成品和成品的检验项目包括：含量：效价测定：细胞病变抑制法蛋白含量比活性中国药科大学药物分析教研室