供试品的无菌检查供试品的处理及接种培养基1 、薄膜过滤法1.1 、水溶液供试品取规定量，直接过滤或者配成溶液后过滤。如供试品具有抑菌作用或含防腐剂，须用冲洗液冲洗滤膜，所用的冲洗量、冲洗方法同方法验证试验。冲洗后，如用封闭式薄膜过滤器，分别将100ml 硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基加入相应的滤筒内。如采用一般薄膜过滤器，取出滤膜，将其分成3 等份，分别置于含50ml 硫乙醇酸盐流体培养基及改良马丁培养基容器中，其中一份做阳性对照用。1.2 、可溶于水的固体制剂供试品取规定量，加适宜的稀释液溶解或按标签说明复溶，照1.1 方法操作。供试品的无菌检查1.3 、非水溶性制剂供试品取规定量，直接过滤；或混合溶于含聚山梨酯80 或其他适宜乳化剂的稀释液中，混匀，过滤。用含0.1 ～1% 聚山梨酯80 的冲洗液冲洗滤膜至少3 次。滤膜于含或不含聚山梨酯80 的培养基中培养。接种培养基的方法照1.1 操作。1.4 、可溶于十四烷酸异丙酯的膏剂和粘性油剂供试品取规定量，混合至适量的无菌十四烷酸异丙酯中，溶解，过滤。对仍然无法过滤的供试品，于含有无菌十四烷酸异丙酯中的供试液中加入不少于100ml 的稀释液，振摇萃取，静置，取下层水相作为供试液过滤。过滤后滤膜冲洗及接种培养基照非水溶性制剂供试品项下的方法操作。供试品的无菌检查2 、直接接种法取规定量供试品分别接种至各含硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基的容器中。2.1 、固体制剂供试品取规定量直接接种至各管培养基中。或加入适宜的溶剂溶解，或按标签说明复溶后，取规定量接种至各管培养基中。2.2 、非水溶性制剂供试品取规定量，混合，加入适量的聚山梨酯80 或其它适宜的乳化剂及稀释剂使其乳化，接种至各管培养基中。或直接接种至含聚山梨酯80 或其它适宜乳化剂的各管培养基中。无菌检查法2010.12 提纲定义定义系指用于检查药典要求无菌的药品、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。< 符合规定> 的意义：仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染。检查环境要求常见检验品种培养基硫乙醇酸盐流体培养基30 ～35℃红色氧化层（h ＜深度的1/5 ）100℃水浴加热除去氧化层，时间不超过20 分钟灭菌后放置3 天沸水浴，10 分钟后改良马丁培养基23 ～28℃无菌性检查每批培养基随机取不少于5 支（瓶）, 培养14 天, 应无菌生长。灵敏度检查硫乙醇酸盐流体培养基12ml ，9 支，4 种菌，30 ～35 ℃培养3 天。改良马丁培养基9ml ，5 支，2 种菌（白色念珠菌、黑曲霉），23 ～25 ℃培养5 天。结果判断：空白管应无菌生长, 加菌管均生长良好。菌液制备（＜100 cfu/ml 的菌悬液）硫乙醇酸盐流体培养基灵敏度检查试验生孢梭菌铜绿假单胞菌枯草芽孢杆菌金黄色葡萄球菌稀释液以及冲洗液0.1% 蛋白胨水溶液稀释液如果蛋白胨溶液浑浊，应过滤pH7.0 氯化钠- 蛋白胨缓冲液稀释液聚山梨酯80-0.1% 蛋白胨水溶液非水溶液制剂供试品的冲洗十四烷酸异丙酯膏剂和粘性油剂的溶剂膜滤除菌方法学验证试验何时须进行方法学验证当供试品为新的产品时当供试品的组分、检验条件发生改变时验证用菌株：金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉菌种要求：不得超过5 代加菌量：＜100cfu 取样量：只需确定总检验量即可检查方法的选择薄膜过滤法：适用于有抗菌作用或大容量的供试品，首选直接接种法：适用于非抗菌作用的供试品薄膜过滤法取规定量供试品按薄膜过滤法过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入小于100cfu 的试验菌，过滤。取出滤膜接种至硫乙醇酸盐流体培养基或改良马丁培养基中，或将培养基加至滤筒内。另取一装有同体积培养基的容器，加入等量试验菌，作为对照。置规定温度培养3 ～5 天。各试验菌同法操作。方法学验证试验直接接种法取硫乙醇酸盐流体培养基8 管，分别两两接入小于100cfu 的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌；另取改良马丁培养基4 管，分别两两接入小于100cfu 的白色念珠菌、黑曲霉。两相同菌种管中，1 管接入规定量的供试品，另1 管作为对照，置规定温度培养3 ～5 天。培养基装量要求每个容器中接种的供试品体积不得大于培养基体积的10 ％硫乙醇酸盐流体培养基≥15ml/ 管改良马丁培养基≥10ml/ 管结果判断供试品的无菌检查明确检验数量与检验量检验数量是指一次试验所用供试品最小包装容器的数量。检验量是指一次试验所用的供试品总量（g 或ml ）。根据供试品的情况，确定检样数量批出厂or 上市抽检；（出厂产品表1 ；上市产品表2 、表3 ）固体制剂or 液体制剂；（液体表2 ；固体表3 ）直接接种法or 薄膜过滤法（薄膜过滤法应增加1/2 的最小检验数量作阳性对照用；直接接种法应增加供试品无菌检查时每个培养基接种的样品量作阳性对照用）参考药典附录79 页表1 ，表2 ，表3 供试品的无菌检查阳性对照无抑菌作用及抗革兰阳性菌为主的供试品金黄色葡萄球菌为对照菌抗革兰阴性菌为主的供试品大肠埃希菌为对照菌抗厌氧菌的供试品生孢梭菌为对照菌抗真菌的供试品白色念珠菌为对照菌。阴性对照取相应溶剂和稀释液、冲洗液同法操作。供试品的无菌检查培养及观察细菌30 ～35℃，霉菌23 ～28℃培养14 天。14 天后，不能从外观上判断有无微生物生长，可取该培养液适量转种至同种新鲜培养基中，细菌培养2 天、真菌培养3 天，观察是否再出现浑浊；或取培养液涂片，染色，镜检，判断是否有菌。结果判断阳性对照管应生长良好，阴性对照管不得有菌生长。否则，试验无效。若供试品管均澄清，或虽显浑浊但经确证无菌生长，判供试品符合规定。若供试品管中任何一管显浑浊并确证有菌生长，判供试品不符合规定，除非能充分证明试验结果无效，即生长的微生物非供试品所含。www.book118.com www.book118.com www.book118.com www.book118.com www.book118.com www.book118.com