液相色谱基础知识Waters LC School 培训教材常见的分离方式蒸馏离心电泳过滤超滤色谱色谱法的分类HPLC 分离的机理典型的仪器配置液相色谱的应用（一）“分析型液相色谱”定性及定量分析灵敏度的要求样品的复杂性样品量的要求精度及准确度的要求容易使用液相色谱的应用（二）“制备型液相色谱”分离及纯化化合物的稳定性样品的复杂性制备量的要求纯度的要求，及纯度的鉴定方法的安全性开发液相色谱方法什么是色谱的分辨率？影响分辨率的因素：K’，a，N 分辨率的方程∶k' 是容量因子，表达了样品与柱填料的作用强弱。a 是选择性系数，描述两化合物分离的好坏程度。是化学因素。N 是理论塔板数，描述色谱峰的谱带展宽程度。色谱柱的柱效N 用“切线”法计算柱效用“5 ”法计算柱效提高柱效的方法色谱柱本身减小填料的颗粒度找到最佳的流速(根据不同内径) 合适的温度降低溶剂的粘度增加柱长其他影响柱效的因素柱外效应连接管路进样器、检测器进样体积进样量容量因子k' 改变k' 值的方法∶调节流动相的极性、pH 、离子强度等梯度淋洗选择性系数a 定义∶a =1 时两组分分不开，改变a的途径改变固定相改变流动相改变温度改变样品的本身性质a  ，k' ，N∶如何控制分辨率? 液相色谱的检测模式色谱条件的优化开发液相色谱方法分辨率是色谱分离中主要考虑的因素在开发色谱方法时，有很多因素是很重要的。除分辨率之外，以下几个因素都要考虑。 灵敏度载样量分析速度溶剂损耗问题∶什么样的分离结果是好的?分辨率? 分辨率的公式：理论塔板数计算公式：W		s	  方法Wtan	16	 切线法Wh		5.54	 半峰高W3s	9	 3s W4s	16	 4s W5s	25	 5s Inject Inject 不好的色谱柱的柱效反而比好色谱柱的要高，因为其拖尾部分测不出来Good Column Bad Column Inject Inject 与峰高的关系与R的关系灵敏度、选择性、及适应能力成本容易使用色谱柱寿命效率