第三章药物的杂质检查第三章药物的杂质检查 Test for purity 有效性　针对某些药效进行检查的项目如Al(OH)3 的制酸力，反映主要质量；明胶的凝冻度，控制物理性能；利福平的结晶度，影响生物利用度均一性　含量均一性如“含量均匀度”试验二、杂质来源与种类 source and sorts of impurities 酸度：水解试剂带入乙醇中不溶物：水解中间体(糊精) SO32- ：产品用H2SO3 漂白可溶性淀粉：水解不完全2. 贮藏过程中产生杂质的种类(1) 一般杂质：在多种药物中普遍存在的杂质。(Cl-  SO42-  Pb  As  Fe)  有害杂质( Pb  As )  信号杂质（Cl-  SO42- ）：考察生产工艺，反映药物的纯度水平(2) 特殊杂质：个别药物的生产及贮藏中引入的杂质。杂质的限量：药物中所含杂质的最大允许量。限量表示(g/g) ：百分之几（%）百万分之几（10-6 ）限量检查：检查所含杂质是否超过杂质限量的规定，通常不要求测定其准确含量。杂质限量检查方法取一定量(C·V) 与被检杂质相同的纯品或对照品配成对照品溶液，与一定量(S) 药物供试溶液在相同条件下处理后，比较反应结果，以确定杂质含量是否超过规定。杂质限量的计算：式中：L 杂质的限度（%） C 对照液浓度（g/ml ） V 对照液的加入体积（ml) S  供试品的量(g) 注意: 单位统一例1  ：对乙酰氨基酚中氯化物的检查：样2.0g 溶于100ml 水中，取25ml 检查Cl- ，与标准NaCl 溶液(10μg/ml) 5ml 对照液相比，不得更深。C= 10μg/ml V=5.0ml  S= 25 2.0 100=0.5g 第二节一般杂质检查方法条件：硝酸酸性条件（稀硝酸10ml ）反应试剂：硝酸银试液1.0ml 杂质对照：NaCl (10μg/ml) 灵敏度范围：50~80 g / 50ml 讨论：选择稀硝酸反应条件的意义。二、重金属（Heavy Metals ）的检查1、第一法硫代乙酰胺法适用对象：溶于水、稀酸和乙醇的药物原理：Pb2+ + 醋酸盐缓冲液+ 硫代乙酰胺(CH3CSNH2)  PbS (黄~棕黑) 条件：　　介质：醋酸盐缓冲液(pH 3.5)  2ml  　　试剂：硫代乙酰胺(CH3CSNH2) 2ml 　　杂质对照液：PbNO3 (10μg/ml) 　　灵敏度范围：10~20 g / 27ml  葡萄糖中重金属的检查：样4.0g 溶于23ml 水，加入2ml 缓冲盐，依法检查，其重金属不得超过百万分之五，取标准铅（10μg/ml ），v=? C= 10μg/ml  L= 5 10-6 S=4.0g  第二法：含芳环或杂环的有机药物如苯佐卡因、甲硝唑第三法: 溶于碱的药物或在稀酸产生沉淀的药物如磺胺类、巴比妥类第四法：铅斑法C 垫圈(外径10mm, 内径6mm)  D 滤膜(直径10mm, 孔径3.0μm) E 辅助滤板三、砷盐(arsenic)  第一法古蔡氏法Gutzeit  第二法Ag-DDC 法白田道夫法Bettendorff  古蔡氏法：SbH3+HgBr2→SbH2(HgBr)+HBr 锑斑检查砷盐仪器装置二乙基二硫代氨基甲酸银法Ag-diethyldithiocarbamate Ag-DDC 法四、干燥失重（loss on drying ）恒温干燥干燥剂干燥减压干燥热分析法thermal analysis,TA 热重分析法 thermal gravimetric analysis,TGA : 草酸钙(CaC2O4·H2O) 的热重曲线盐酸多巴酚丁胺的DTA-TGA 曲线15℃/min Program 1、纯双氯青霉素转变成液态并降解2 、加入乳糖3 、加入硬脂酸镁4 、加入硬脂酸，主成分峰消失5 、单加入硬脂酸，主峰亦消失甲磺酸二氢麦角毒碱的DSC-TGA 曲线不纯物质的DSC 图不同纯度苯甲酸的DSC 曲线温度(℃) 温度(℃) 有机溶剂残留量测定法　　有机溶剂限度,% 　限度,% 　　　苯　　0.01 0.0002 氯仿0.005 0.006 二氧六环0.01  0.038 二氯甲烷0.01  0.06 吡啶0.01  0.02 甲苯0.01  0.089 环氧乙烷0.001 0.001 Ch.P(95)  Ch.P(2000) 六、有机溶剂残留量测定嗅味及挥发性的差异颜色的差异溶解行为的差异旋光性质的差异吸附或分配性质的差异对光选择吸收性质的差异第三节特殊杂质检查化学性质上差异：　酸、碱性质的差异氧化还原性的差异杂质与一定试剂产生沉淀杂质与一定试剂产生颜色反应杂质与一定试剂反应产生气体旋光性质的差异Ch.P 规定黄体酮在乙醇中的比旋度为：＋186° ～198°  黄体酮及其中间体的比旋度（溶剂：乙醇）化合物　　浓度%　温度℃[а]D 黄体酮　1 ～1.4 　20 ～25 　+193°±4° 醋酸双烯醇酮0.9 20 -31°±2° 醋酸妊娠烯醇酮～1  常温+20°±2° 220  260  300 nm 肾上腺酮及肾上腺素的紫外吸收曲线吸附或分配性质的差异薄层色谱法TLC 一般要求：颗粒直径10~40μm 薄层涂布：无粘合剂含粘合剂：常加入10~15%  煅石膏(CaSO4·2H2O,180℃烘4h) 或0.5~0.7% 羧甲基纤维素钠水溶液常用方法：杂质对照品法供试品自身对照法对照药物法供试品10μl N- 甲基哌嗪10μl  50mg/ml  50μg/ml  枸橼酸乙胺嗪I2 蒸气显色规定：如显杂质斑点，不得多于2个，其颜色与对照品主斑点相比较，不得更深。高效液相色谱法HPLC 主要方法：峰面积归一化法不加校正因子的主成分自身对照法加校正因子的主成分自身对照法：用于有杂质对照品时，杂质的含量测定。内标法加校正因子测定供试品中杂质的含量：用于有杂质对照品时，杂质的含量测定。外标法测定供试品中某个杂质或主成分的含量：用于有杂质对照品或杂质对照品易制备的情况。Ⅰ供试品Ⅱ供试品+内标℃0 100 200 △T 1 2 3 4 5 DTA 扫描图℃50 100 150 200 DSC TGA t(min) △T 温度97.2% 98.6% 标准品50  80  110 140 170  200 230  260 290 15.00 0.00 7.50 盐酸舍曲林晶型Ⅰ的DSC 曲线mcal/sec 50  80  110 140 170  200 230 260 290 5.00 0.00 2.50 mcal/sec 盐酸舍曲林晶型Ⅲ的DSC 曲线色谱系统与系统适用性试验System Suitability Tests; SSTs 以直径为0.25~0.18mm 的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小球作为固定相，柱温为80~170℃；并符合下列条件：⑴用待测物的色谱峰计算的N应大于1000 ；⑵内标物与待测物的两个色谱峰的R≥1.5 ；⑶每个标准溶液进样5次，所得待测物与内标物峰面积之比的RSD≤5% ；若以外标法测定，所得待测物峰面积的RSD≤10%  物理性质上差异：λmax310nm 比移值地塞米松磷酸钠地塞米松20mg/ml 0.20mg/ml  如有1~2 个杂质点超过时，应不得深于0.01% 对照液的主斑点。其中有1个杂质点应不深于0.002% 供试品的主斑点。氨苯砜中检查“有关物质”规定：0.01% 供试品100μg/ml 1% 供试品10mg/ml 0.002% 供试品20μg/ml 水溶液玻璃微孔球凝胶过滤有机溶剂有机凝胶凝胶渗透排阻色谱电解质水溶液离子交换填料离子交换色谱RP 流动相中加离子对试剂ODS 离子对色谱甲醇/水乙腈/水四氢呋喃/水十八烷基硅烷键合硅胶反相色谱正己烷,氯仿,二氧六环等极性化学键合硅胶极性小的有机溶剂硅胶正相色谱流动相柱填充剂分类中国药科大学药分教研室Test for purity 中国药科大学药分教研室概述一般杂质检查特殊杂质检查一、概述安全性　进行异常毒性、热原、降压物质和无菌等项目纯度要求对杂质限量进行检查一、概述例：纯度要求Pethidine Hydrochloride 盐酸哌替啶无效异构体I  无效异构体II 1. 制备过程中产生外界条件影响：日光、空气、温度、湿度、微生物等引起药物产生例如：麻醉乙醚醛及有毒的过氧化物3、杂质的限量检查（limit test ）NaCl 对照液葡萄糖稀硝酸10ml  硝酸银1ml  稀硝酸10ml  硝酸银1ml 对照液浊度> 供试液浊度一、氯化物（Chloride ）检查原理：比浊方法：同置于黑色背景上，自上向下观察。平行操作原则。3.  若供试品有色，需经处理后方可检查。注意：）干扰及排除（1）外消色法：如高锰酸钾中氯化物的检查，可先加乙醇适量，使其还原褪色后再依法检查。（2）内消色法：倍量法供试品有色处理方法V = 2.0 ml  例2 ：注意：供试品如有色，需经处理后方可检查。1. 外消色法：在对照管中加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液。2. 内消色法。3. 改用第四法，微孔滤膜过滤法。CD A B F E 滤器下部滤器上盖连接头微孔滤膜过滤法检查重金属装置国内外常用方法：Zn+HCl 白田道夫法8cm 18cm 有孔玻璃旋塞导气管AsH3 发生瓶干燥失重物主要指水分( 结晶水或吸附水) 或挥发性物质在程序控制温度下,测量物质的质量与温度关系的方法差示热分析法在程序控制温度下,测定供试品与参比物质之间的温差(ΔT) 随温度变化的函数关系differential thermal analysis,DTA: ΔG1 ΔG2 ΔG3 1000 800 600 400 200 0 W T1 T2 T3 398 838 635 478 134 226 T(℃) 在温度T1 时CaC2O4·H2O CaC2O4+H2O 在温度T2 时CaC2O4 CaCO3+CO 在温度T3 时CaCO3  CaO+CO2 · · · 样品参比加热炉至信号放大器加热器导线炉温控制器⑴热差曲线的直线⑶吸热峰⑵放热峰⑶⑴⑵T(℃) △T 热差曲线示意图差示热分析仪主要结构简图100 90 80 70 60 DTA T(℃/min) 196℃233℃* * 中国药科大学药分教研室