第十四章中药制剂分析O O O O O O O O O O × × × 大补阴丸黄柏的TLC 法鉴别薄层板的选择（四）中药鉴别新技术－中药指 纹图谱定义：中药材或中药制剂经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标定该中药材或中药制剂特性的共有峰的图谱2. 色谱指纹图谱的基本属性中国药典中药制剂含量测定所占比例版本% 1977 1.48 1985 5.31 1990 8.73 1995 12.81 2000 62.09 （HPLC 36% TLCS 24% GC 3%) 2000 年版中国药典（2000 年版）薄层扫描法品种品种数量TLCS 数量占总数% 534 （药材）20 3.74 458 （成药）32 6.99 978 （总数）52 10.73 2000 年版中国药典（2000 年版）HPLC 法品种品种数量HPLC 数量占总数% 534 （药材）54 10.11 458 （成药）48 10.48 978 （总数）102 20.59 应用实例-小青龙合剂[处方] 麻黄125g 桂枝125g 白芍125g 干姜125 五味子125g 细辛62g 甘草(蜜炙) 法半夏188g NOTES ：合剂是在传统汤剂基础上改进后的一种新剂型应用实例-小青龙合剂[ 制法] 以上八味，细辛、桂枝提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集，药渣与白芍、麻黄、五味子、甘草加水煎煮至味尽，合并煎液，滤过，滤液和蒸馏后的水溶液合并，浓缩至约1000ml 。法半夏、甘姜照流浸膏剂项下渗漉法，用70% 乙醇作溶剂，浸渍24 小时后进行渗漉，漉液浓缩，与上述药液合并，静置，滤过，滤液浓缩至1000ml ，加入苯甲酸钠3g 与细辛、桂枝挥发油，搅匀，即得。[性状] 本品为棕黑色的液体；气微香，味甜、微辛。[ 功能与主治] 解表化饮，止咳平喘。用于风寒水饮，恶寒发热，无汗，喘咳痰稀。[ 用法与用量] 口服，一次10-20ml ，一日3次，用时摇匀。方药分析：君麻黄—发汗为君臣桂枝—解表为臣佐甘草—恐发汗太过, 佐以甘草缓之使白芍、干姜、细辛、法半夏、五味子—几药合力共为使。可外发汗，内行水，散表里之邪。汉代张仲景《伤寒论》——小青龙汤近代由重庆桐君阁中药厂该汤剂为合剂本方治疗伤寒表不解，心下有水气，干呕，发热而咳。近代也用于慢性支气管炎，支气管哮喘、肺气肿，均见咳、喘、痰白清稀者。供试品溶液与阴性对照液的制备：取合剂10 ml ，石油醚分3次萃取，合并石油醚萃取液[油层]，浓缩至1ml ，为供试品溶液A；[ 水层]用Na2CO3 调PH11-12 ，用氯仿萃取，合并氯仿萃取液，回收氯仿至干，残渣用1ml 甲醇溶解，为供试品溶液B；NOTES ：阴性对照液如上法同步进行。1. 桂皮醛的鉴别取供试品液A、阴性对照液、桂皮醛对照液（1ug/ml ）15ul ，点于同一硅胶G板上，环己烷-乙酸乙酯（17 ：3）展开，晾干，喷2，4—二硝基苯肼乙醇T.S ，供试品A与对照品在相应位置上显相同的橙色斑点，而阴性对照液无此斑点。2. 细辛挥发油的鉴别取供试品液A、阴性对照液、细辛挥发油对照液（1：10 乙醚液）5ul ，点于同一硅胶G板上，环己烷展开，晾干，喷10% 香草醛浓硫酸T.S ，加热至显色，供试品A与对照品在相应位置上显相同的粉红色斑点，而阴性对照液无此斑点。3. 麻黄碱的鉴别取供试品液B，阴性对照液，麻黄碱对照品液（1mg/ml ）各5ul ，点于同一硅胶G，氯仿-甲醇-浓氨水（20 ：5：0.5 ）展开，晾干，喷茚三酮T.S ，加热至斑点显色，供试品B与对照品在相应位置上显相同的蓝紫色斑点，而阴性对照液无此斑点。取合剂5ml ，上聚酰胺柱，DW 洗脱，洗脱液水浴浓缩至干，用1ml 甲醇溶解，为供试品溶液C；聚酰胺柱再用95% 乙醇洗脱，弃取洗脱液，用3M 氨乙醇液洗脱，收集洗脱液水浴蒸干，1ml 甲醇溶解，为供试品溶液D。4. 芍药甙的鉴别取供试品液C、阴性对照液、芍药甙对照液（1mg/ml ）10ul ，点于同一硅胶G板上，氯仿-乙酸乙酯-甲醇-冰醋酸-甲酸（8：1：2：0.04 ）展开，晾干，喷10% 硫酸乙醇液，加热至显色，供试品C与对照品在相应位置上显相同的紫色斑点，而阴性对照液无此斑点。5. 甘草酸的鉴别取供试品液D、阴性对照液、甘草酸铵对照液（2mg/ml ）2ul ，点于同一硅胶G板上，乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-蒸馏水（30 ：2：2：4）展开，晾干，喷10% 硫酸乙醇液，加热至显色，UV 灯365nm 观察，供试品D与对照品在相应位置上显相同的紫色斑点，而阴性对照液无此斑点。含量测定HPLC 法测定芍药甙的含量仪器与色谱条件BECKMAN 332 型高效液相色谱仪163 型可变波长紫外检测仪，220nm 427 型记录及数据处理仪色谱柱为YWGC18 流动相乙腈-水（15 ：85 ）标准曲线制备精密称取芍药甙5.08mg ，溶于水至50ml 量瓶中，定容，分别吸取0.50 、1.00 、1.50 、2.00ml 于10ml 量瓶中定容。回收率测定精密吸取除去白芍制成的合剂（即阴性对照液）0.3ml 与适量芍药甙对照品液，通过0.5g 聚酰胺柱，用水洗脱至50ml 量瓶中至刻度，依前述条件测定，平均回收率为99.42% ，RSD 为0.23% （n=3 ）。样品测定取自制小青龙合剂摇匀，用滤纸过滤，精密吸取0.3ml 滤液通过聚酰胺柱，以不同回收率测定条件进行测定。分析实例—万氏牛黄清心丸[处方] 牛黄10g 朱砂60g 黄连200g 黄芩120g 栀子120g 郁金80g 分析实例—万氏牛黄清心丸[制法]以上六味，除牛黄外，朱砂水飞或粉碎成极细粉；其余黄连等四味粉碎成细粉；将牛黄研细，与上述粉末配研，过筛，混匀。每100g 粉末加炼蜜100-200g 制成大蜜丸，即得。[性状]本品为红棕色至棕褐色的大蜜丸；气特异，味甜、微涩、苦。[ 功能主治]清热解毒，镇惊安神。用于热邪内闭，烦躁不安，神昏谵语，小儿高热惊厥。[方药分析] 本方来源于明. 痘疹世医》心法，本方为清心开窍剂，主治热邪内陷心包所致窍闭神昏症。方中牛黄，清心解毒，豁痰开窍为君药；黄连、黄芩、栀子清热泻火，为臣药；朱砂清心，重镇安神，郁金行气开窍共为佐使药，合用以奏透邪泻热，开窍安神之效。[方药分析] 牛黄—清热解毒药，主含胆酸类成分。黄连—清热燥湿药，主要为小檗碱。黄芩—清热燥湿药，主要为黄酮类。栀子—清热泻火药，主含栀子甙。朱砂—安神药，主含硫化汞（HgS ）。郁金—活血去瘀药，主含挥发油。鉴别显微鉴别郁金—糊化淀粉团块几乎无色。栀子—种皮石细胞。黄芩—纤维淡黄色，梭形，厚壁，孔沟细。黄连—纤维鲜黄色，壁稍厚，纹孔明显。朱砂—不规则块状物或颗粒状物，暗红棕色、鲜红色或棕黄色。化学鉴别1. 朱砂的鉴别取本品3g ，加水适量，研匀，反复洗去悬浮物，可得少量朱红色沉淀，取出，加入盐酸1ml 及铜片少量，加热煮沸，铜片由黄色变为银白色。HgS+2HCl+Cu CuCl2+Hg+H2S NOTES ：在酸性条件下，朱砂与铜片发生置换反应析出金属汞，在铜片表面形成银白色汞齐。2. 人工牛黄的鉴别取本品，剪碎，加硅藻土0.6g ，研匀，加氯仿10ml 、冰醋酸0.5ml ，加热回流30min, 放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml 使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。胆酸和猪去氧胆酸加乙醇制成1ml 含1mg 的混合溶液，作为对照品溶液。TLC 法CMC-Na ，硅胶G 展开剂醋酸乙酯-正己烷-醋酸-甲醇（32:6:1:1 ）显色剂10% 磷钼酸乙醇液，1100C,10min 3. 黄芩的鉴别供试品溶液的制备：取本品3g ，剪碎，加硅藻土0.5g ，研匀，加甲醇20ml ，加热回流1hr, 放冷，滤过，滤液作为供试品溶液。对照品溶液的制备：黄芩甙对照品加甲醇制成每1ml 含1mg 的溶液，作为对照品溶液。TLC 法CMC-Na ，硅胶G （4% 醋酸钠）展开剂醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水（5:3:1:1 ）显色剂2% 三氯化铁乙醇液4. 栀子的鉴别供试品溶液的制备：取本品3g ，加乙醚15ml ，研磨，弃去乙醚。残渣挥干乙醚，加醋酸乙酯30ml ，加热回流1hr, 放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇3ml 溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。对照品溶液的制备：栀子甙对照品加甲醇制成每1ml 含1mg 的溶液，作为对照品溶液。TLC 法CMC-Na ，硅胶G 展开剂醋酸乙酯-丙酮-甲酸-水（10 : 7 : 2 : 0.5 ）显色剂10% 硫酸乙醇1050C, 10min 5. 黄连的鉴别供试品溶液的制备：取含量测定项下剩余的盐酸-甲醇提取液4ml ，水浴蒸干，残渣加甲醇溶解，使成1ml 作为供试品溶液。对照药材溶液的制备：黄连对照药材50mg ，加甲醇10ml ，回流加热15min , 滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml 使溶解，作为对照药材溶液。对照品溶液的制备：再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml 含0.5mg 的溶液，作为对照品溶液。TLC 法硅胶G CMC-Na 展开剂苯-醋酸乙酯-甲醇-异丙醇-浓氨试液（12:6:3:3:1 ）显色剂UV （365nm ）含量测定1. 朱砂取本品约5g ，剪碎，精密称定，置250ml 凯氏烧瓶中，加硫酸30ml 与硝酸钾8g ，加热俟溶液至近无色，放冷，转入250ml 锥形瓶中，用水50ml 分次洗涤烧瓶，洗液并人溶液中，滴加1% 高锰酸钾溶液至显粉红色，两分钟内不消失，再滴加2% 硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2ml ，用硫氰酸铵滴定液滴定，即得。每1ml 的硫氰酸铵滴定液相当于11.63mg 的硫化汞。硫酸与硝酸钾—分解试样及有机破坏高锰酸钾溶液—除去试样分解时产生的亚硫酸粉红色两分钟内不消失—亚硫酸可将Hg2+ 还原Hg+ 使含量变低，观察两分钟完全除去亚硫酸硫酸亚铁溶液—除去过量的高锰酸钾滴定反应Hg2+ +2CNS-→Hg(CNS)2 显色反应CNS-( 过量)+Fe3+→Fe(CNS)2+( 红色) 2. 黄连取本品约4g ，剪碎，精密称定，置索氏提取器，盐酸-甲醇（1:100 ）适量，加热回流提取至提取液无色，提取液移至50ml 量瓶中，用盐酸-甲醇适量稀释至刻度，摇匀，照柱色谱法，精密量取5ml ，上AL2O3 柱,25ml 洗脱，收集洗液置50ml 量瓶中，乙醇稀释至刻度，精密吸取2ml 置50ml 量瓶中，加0.05mol/L 硫酸溶液稀释至刻度，摇匀。UV345nm 测定A。为728, 本品含总生物碱按盐酸小檗碱计不得少于1.7% 。黄连方中臣药之首用量最大有效成分清楚黄连有效成分为小檗碱，尚含其它少量生物碱，如黄连碱、甲基黄连碱、药根碱、巴马亭等，均为原小檗碱型生物碱。硫酸溶液—在酸性条件下，N原子呈共轭体系的季铵状态，在345nm 处有最大吸收。其它五味药的空白提取液在该波长处略有吸收，约相当于0.3% 小檗碱，因此测定结果偏高。本品为蜜丸制剂，其黄连生物碱溶出速率较药材相对缓慢，回流至提取液无色后应放置一段时间。黄芩甙供试品黄芩空白栀子甙供试品栀子空白盐酸小檗碱黄连公式品供试品黄连空白（四）HPLC 法RP - HPLC 色谱柱ODS 流动相甲醇- 水PIC 反离子氢氧化四丁基铵色谱柱ODS RP - PIC 反离子烷基磺酸盐无机阴离子外标法和内标法离子对色谱法（PIC ）极性流动相中加入离子对试剂，与被分析离子生成中性离子